第13章 细胞衰老与凋亡.docVIP

第十三章 细胞衰老与凋亡 主要内容： 第一节 细胞衰老 (cellular aging ) 第二节 细胞凋亡(Apoptosis) 第一节 细胞衰老(cellular aging或cell senescence) 一、Hayflick界限(Hayflick Limitation） 1、概念：细胞，至少是培养的二倍体细胞，不是不死的，而是有一定的寿命；它们的增殖能力不是无限的，而是有一定的界限 2、二倍体细胞的衰老是由细胞本身决定的 1）决定细胞衰老的因素在细胞内部，而不是外部的环境 2）是细胞核而不是细胞质决定了细胞衰老 二、衰老细胞的结构变化 1、细胞核的变化 1） 体外培养的二倍体细胞，细胞核随着细胞分裂次数的增加不断增大 2）细胞核的核膜内折（invagination）、染色质固缩化 2、内质网的变化: 内质网成分弥散性地分散于核周胞质中，粗面内质网的总量似乎是减少了 3、线粒体的变化: 细胞中线粒体的数量随年龄增大而减少，而其体积则随龄增大 4、致密体的生成 5、膜系统的变化 1） 膜流动性降低、韧性减小 2）细胞间间隙连接减少;组成间隙连接的膜内颗粒聚集体变小。 三、细胞衰老的分子机理 1、氧化性损伤学说：代谢过程中产生的活性氧基团或分子（ROS--- O2-， OH- ， H2O2 ），引发的氧化性损伤的积累，最终导致衰老。 2、端粒与衰老：发现端粒长度确实与衰老有着密切的关系，提出细胞衰老的 “有丝分裂钟”学说（Harley,1990） 3、 rDNA与衰老: 酵母染色体外rDNA 环（ERC）的积累，导致细胞衰老。 4、 沉默信息调节蛋白复合物（Sir complex）与衰老：Sir complex 存在于异染色质区，其作用在于阻断所在位点DNA转录。 5、SGS1基因和WRN基因与衰老： SGS1基因和WRN基因同源,编码解旋酶; 酵母sgs1突变体寿命明显短于野生型（平均9.5代:24.5代）; wrn突变 引发早老症. 6、 发育程序与衰老 7、线粒体DNA与衰老: Sen-DNA(80年代);mtDNA突变积累与细胞衰老有关. 第二节 细胞凋亡(Apoptosis) 一、细胞凋亡的概念及其生物学意义 1、概念：细胞凋亡（apoptosis） 是指细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身的遗传基因所决定的调控程序，自己结束其生命的过程；它是一个主动的，高度有序的，基因调控的，并需要一系列酶参与的正常细胞生理学过程。 2、细胞凋亡（apoptosis）与细胞坏死(necrosis) 3、细胞凋亡的生物学意义 1）维持内环境稳定，保证新陈代谢正常进行； 2）清除有害因子，保证机体健康发育； 3）消除多余或无用组织细胞，维护机体正常发育。 4）凋亡的可诱导性为肿瘤的治疗提供了新的思路。 二、细胞凋亡的形态学特征 1、凋亡的起始：细胞表面的特化结构如微绒毛消失，细胞间接触的消失，但细胞膜依然完整；线粒体大体完整，但核糖体逐渐从内质网上脱离，内质网囊腔膨胀，并逐渐与质膜融合；染色质固缩，形成新月形帽状结构等形态，沿着核膜分布 2、凋亡小体的形成：在这一阶段，首先是细胞核内染色质浓缩，继而断裂为大小不等的DNA片断，与某些细胞器如线粒体等一起聚集，为内陷的细胞膜所包被。从外观上来看，细胞表面产生了很多泡状或芽状突起，随后，逐渐分隔，形成单个的凋亡小体。 3、凋亡小体逐渐为邻近的细胞或吞噬细胞所吞噬：从细胞凋亡开始，到凋亡小体的出现才数分钟，而整个细胞凋亡过程可延续4～9h。 三、细胞凋亡的生化特征 1、细胞凋亡的主要特征是形成大小为180～200bp特征性的DNA ladders 2、凋亡细胞组织转谷氨酰胺tTG（tissue Transglutaminase）积累并达到较高水平 tTG催化某些蛋白质的翻译后修饰，主要是通过建立谷氨酰胺和赖氨酸之间的交联以及多胺掺入蛋白质而实现的，其结果是导致蛋白质聚合。这类蛋白聚合物不溶于水，不会被溶酶体所含有的酶类降解，它们进入凋亡小体，有助于保持凋亡小体暂时的膜的完整性，防止有害物质的溢出。 四、诱导细胞凋亡的因子 1、物理性因子，包括射线（紫外线，( 射线等），较温和的温度刺激（如热激，冷激）等 2、化学及生物因子：包括活性氧基团和分子，DNA和蛋白质合成的抑制剂，激素，细胞生长因子，肿瘤坏死因子(（TNF(），抗Fas/Apo-1/CD95抗体等 五、细胞凋亡的检测 1、形态学观测：染色法、透射和扫描电镜观察 2、DNA电泳：DNA片段就呈现出梯状条带 3、TUNEL测定法，即DNA断裂的原位末端标记法 4、彗星电泳法（comet assay） 5、流式