酒精性肾损害及血小板源生长因子-B在肾脏的表达.pdfVIP

素一生物素(SABC)试剂盒及3,3一二氨基联苯胺(DAB)显色试 剂。 三、主要仪器 1、石蜡切片机。 2、光学显微镜及照相装!。 3,JEM一1200EM透射电镜。 4、显徽(荧光)图像分析系统。 实 验 方 法 一、动物模型 55只大鼠随机分为两组:对照组20只，模型组35只。棋型 组给予40%乙醉,8g·kg。day一’，分三次灌胃至4周末。自第5 周开始，将乙醉浓度增至509,9g·kg一‘·day一’，分三次灌胃至8 周末。自第9周开始，50%乙醉,log·kg一’·甸一，，分三次徽霄 至12周末。对照组动物给予相同容积的生理盐水日三次灌胃。 于开始灌胃4周末、8周末、12周末分剧处死模型组10,12,8只及 对照组动物5,5,6只，腹腔静脉取血，取肾脏称重。 二、病理学检查 取肾组织制成石蜡块。将肾组织连续切成2N,m的切片，常规 HE染色，光镜下观察其病理改变。 厂 三、电镜标本制备 取肾组织，超薄切片?ooA,醋酸铀和柠橄酸铅染色，JEM- 1200EX透射电镜观察形态变化。 四、免疫组化ABC法检侧血小板源生长因子一B(PDGF一 B) 石蜡切片脱蜡至水，灭活内源性醉，抗原修复，加正常山羊血 清，加一抗PDGF一B(1:50)4℃过夜，滴加二抗20一37`C20分 ·2 · 钟，ABC复合物20一379020分钟，以上各步均以O.Olm的PBS充 分洗涤。DAB显色，苏木素轻度复染，显徽镜下观察。以细胞浆 中有棕黄色预粒的细胞为阳性细胞。应用显徽(荧光)图像分析 系统对选取视野内PDGF一B免疫组化阳性信号光密度积分值进 行分析。 五、统计学处理: 计盆资料各组间比较采用t检验，率的比较采用X2检验。 实 脸 结 果 一、一般状况 模型组大鼠同对照组相比，一般状态差，毛色无光泽，易激惹， 体重减轻(P0.01),肾顶夕体重的比，两组间无显著性差异(P 0.05)。 二、肾组织病理学改变 对照组肾组织HE 染色标本可见正常的肾小球及肾小管(图 1),酒精滋胃4周末，肾小球轻度系膜增殖，间质局灶性炎性细 胞浸润，肾小管上皮细胞空泡变性(图2,3);8周末，肾小管一间 质出现泡沫细胞(图4);12周末，肾小管上皮细胞肿胀、管腔闭塞 (图5)。 三、电镜下改变 酒精灌胃8周末，肾小管上皮细胞胞浆内可见大A空泡，系膜 细胞区电子致密物沉积(图6,7);12周末，肾小球系膜细胞外墓 质增多，胶原纤维沉积(图8,9)。 四、PDGF一B在肾脏的表达 模型组与对服组相比，肾小球和肾小管内PDGF一B的表达均 增加，具有显着性差异(分别为P0.05和P0.01);随粉乙醉刺 徽时间的延长和荆t的不断增加，各模型组之间肾小管内PDGF ·3 · 一B的表达逐渐增加(P0.01)，而在肾小球内的表达各模型组 之间无显著性差异(P0.05)。(图10一13) 讨 论 乙醉极易吸收人血，可引起多脏器的功能损害。如酒精性脂 肪肝、肝炎、肝纤维化、肝硬化，甚至肝癌。 在体内约有5%一10%的乙醇是在肾脏氧化并排泄的。肾脏 的血液供应丰富，乙醇、乙醛在肾脏的细胞和间质组织内积聚、浓 缩，对肾脏可能造成了一定的损害。临床上部分慢性酒精中毒患 者出现骨质疏松征样变化，这些现象是否由于肾脏等其他脏器的 损害而造成的继发性变化目前尚不清楚。本研究应用酒精祖胃的 方法建立酒精性肾损害的模型，并在其发展的不同阶段观察肾脏 的病理改变。 据报道，让大鼠自由饮用16%酒精，连续观察5个月，发现肾 小球肿胀、基底膜增生、肾小管上皮细胞肿胀等病理改变，尿钙、 礴、镁排泄增加。另有报道，短期的酒精摄人会导致肾小管上皮细 胞肿胀;而中长期的酒精摄人会导致肾脏肿大，间质浮肿，细胞浸 润，间质纤维增殖等