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《食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定 柱后光化学衍生—高效液相色谱法》 编制说明 浙江省海洋水产品质量检验中心 《食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定柱后光化学衍生 —高效液相色谱法》编写组 二0一一年五月 《食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定 柱后光化学衍生 —高效液相色谱法》 编制说明 一、工作情况 1、工作程序 1.1方法来源、背景及意义 黄曲霉毒素（Aflatoxins，AFT）是一类化学结构类似的化合物均为二氢呋喃香豆素的衍生物AFT是真菌的次级代谢产物，主要是由黄曲霉(A.flavus)、寄生曲霉(A.parasiticus)和集蜂曲霉(A.nonius)一些菌株产生的次级代谢产物。上世纪60年代爆发的“数万火鸡突发死亡事件”，黄曲霉毒素开始被人类所认知，经过多年的研究表明，食用黄曲霉毒素污染的食品，不但能引发急性中毒，长期食用更是会引发癌症，黄曲霉毒素是具有致癌性、致突变性和致畸毒性的“三致”作用的毒性极强的物质。 黄曲霉毒素的存在对人类和家畜的健康危害极大，但我们在预防和监控AFT的过程中遇到了很多问题和困难，具体原因及表现如下：①AFT的分布广泛性，几乎对世界范围内的绝大多数食品原料和制成品均有不同程度的污染，尤其是粮油类食物，如花生、谷物、果仁和大豆等食物。②对AFT的预防难度大，这主要的原因是真菌在食物及原料中的存在是非常普遍的，且在栽培、收割、运输、贮藏和加工等过程中，很难控制真菌的生长和繁殖， AFT是多种真菌产生的次级产物，造成了对AFT防治的困难。目前，通过改进和改善管理及环境条件，在一定程度上能减少AFT的污染程度，但在增加经济成本的前提下，也不可缺少对样品中的AFT的监控。③对AFT的去毒难，虽然经过多年的研究和实践表明，可以通过一些措施包括物理分离、热灭活处理、辐射处理、溶剂提取、微生物灭活处理和发酵处理等对产品中的AFT进行除毒操作，但是各个方法的应用都存在局限性，虽能起到去毒效果，但是在一定程度上有很大的副作用，包括影响食品的品质、增加操作繁琐、甚至会造成新的有毒残留物等潜在危害。由此，除了继续深入对黄曲霉毒素的预防、控制和去除方法的研究，能否做到及时有效地对AFT的监控和检测的方法就显得十分重要。 各国制定了诸多的有关AFT的法规，以保护人类的健康及经济利益。其中，对AFT的允许量的设定在逐步降低，例如我国限量标准规定牛乳中的AFB1量不能超过0.5ug/Kg；而美国以及欧盟对黄曲霉毒素的限量更是严格，美国联邦政府规定牛奶中AFT总量不能超过0.5ug/Kg，欧盟国家更是规定了原料奶中的AFM1量不能超过0.05 ug/Kg。对黄曲霉毒素的严格限定，成为了技术性贸易壁垒，不仅阻碍了国际上贸易的交流，更是对AFT的检测技术的应用提出了较高的要求。由此，为了适应国内外对AFT的检测要求，进一步提高检测方法的灵敏度、特异性得到增强、高效经济、简便、易于推广应用等特点的AFT检测技术已迫在眉睫。目前，AFT的检测方法有薄层层析法、高效液相色谱法、荧光分光光度法，酶联免疫吸附法等。TCL法是比较传统检测技术，但该方法操作繁琐、周期长、对操作人员的健康有危害以及灵敏度差无法满足国内外对AFT的允许量设定的要求；酶联免疫吸附法（ELISA）是利用免疫、酶及生化技术来检测AFB1，其具有较好的灵敏度，特异性强、重复性好、测定速度快等优势，已得到了广泛的推广应用，但是发现该方法具有一定的限制性，尤其对含盐量高或者含脂量高的物质中的AFB1的检测，同时因酶本身的不稳定性，检测结果可能会带来的假阳、阴性结果，易受干扰，使ELISA法的准确度不高。 高效液相法（HPLC）的应用，优化了AFT的提纯，荧光增强技术和分析自动化的发展，很好地弥补了TCL法和ELISA法中无法对黄曲霉毒素总量的测定的缺陷，满足国外对AFT总量的限量的设定。在合适的色谱条件下，黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2分离，可以进行定性定量的测定，但AFB1和AFG1的荧光强度较弱，很难进行直接测定，影响了测定AFT总量和AFB1和AFG1的准确性。由此，提高HPLC法对AFB1和AFG1的检测的响应值的方法成为必然，也是完善AFT的检测技术和有效监控AFT手段的关键。SN/T 1736—2006《进出口蜂蜜中黄曲霉毒素的检验方法 高效液相色谱法》，GB/T18979-2003《食品中黄曲霉毒素的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法》,GB/T 5009.23—2006《食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2GB/T 23212—2008《牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2中心SN/T 1736—2006《进出口蜂蜜中黄曲霉毒素的检验方法 高效液相色谱法》，GB/T18979-2003