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Dept.of Biophysics, Peking University School of Basic Medical science *本法在一系列试管中各加相同量的受体制剂、相同量的标记配基、和各管逐渐递增的非标记配基。 *所用放射配基的化学量应当是远未达到使受体饱和的量，最终由非标记配基使受体饱和。 *所以，随着非标记配基的增加，受体结合的放射配基应逐步减少。 *本法各管所加放射性量既然全部相同，非特异结合应基本相同，只需做一个剂量的平行非特异结合管. 四 用非标记配基逐步递增而不改变放射配基浓度的饱和结合实验 Dept.of Biophysics, Peking University School of Basic Medical science 数据处理方面 和普通的多点饱和结合实验基本相同. 不同之处：各管LT和RL(SB)的mol/L数计算上略有不同： ①各管LT的mol/L数 = 放射配基的mol/L数 (所加放射配基的cpm/放射配基比活度) + 各管所加非标记配基mol/L数。 ②各管RL mol/L数的计算是根据放射配基的结合%和非放射配基的结合%相同， 因此RL (SB) 的mol/L数 = LT的mol/L×(实测 cpm ? 非特异结合cpm)/LT 的cpm.。 一旦各管LT和RL (SB) 的mol/L数算出，后面的拟合步骤就和普通多点饱和实验完全相同。 Dept.of Biophysics, Peking University School of Basic Medical science *这种方法克服了多点饱和法标记配基用量较大的缺点，非特异结合测定只有一个剂量的放射配基。 *但是要求放射配基的比活度高，受体密度较高，而且亲和力较高，使未加非标记配基的标本能得到较高的放射性，否则复合物放射性总是随非标记配基逐步增量而降低，难于得到准确的结果。 *此外，此法的关键是标记配基和用于使受体饱和的非标记配基必须是同一种化合物。 注意事项 Dept.of Biophysics, Peking University School of Basic Medical science 五 双位点多点饱和结合实验(区分不同亚型 ) *如果所用的放射配基对同一种受体不同亚型有不同亲和力，则在多点饱和结合实验中不论放射配基的浓度是多少，都将有两类亚型的复合物。 *开始时高亲和力亚型的复合物多，后来此种亚型逐步饱和，低亲和力亚型的复合物逐渐增多。 *实际测到的放射性代表总的复合物，亲和力高、低两种亚型的比例随放射配基浓度的变化而不断改变。 *分别求出两种亚型受体的密度RT1和RT2，以及各自的平衡解离常数KD1和KD2. Dept.of Biophysics, Peking University School of Basic Medical science 双位点饱和结合数学模型 1. 将单位点的Scatchard模型写成如下形式： RL1 = RT1×L/(L+Kd1)， RL2 = RT2×L/( L + Kd2 ) 2. 两者相加得到： 3. RL1+RL2即为实际测量值RL，L = LT-RL。 双位点的数学模型有以下特点：实际测到的RL不是RL1和RL2, 而是RL1+RL2, 因此模型中应只有总RL。 所以要将双位点饱和结合数学模型需要转换成Scatchard模型 Dept.of Biophysics, Peking University School of Basic Medical science 双位点饱和结合实验计算机运算给出的图形举例 双位点多点饱和结合实验中，低亲和力的受体常常所需放射配基浓度很高，不少情况难以达到饱和区。实际工作中有时只能比较可靠地求出高亲和力亚型的参数。 双位点多点饱和结合实验中，也可用非标记配基逐步递增而不改变放射配基浓度的办法进行，其前提和单位点多点饱和结合实验相同。 注意事项: Dept.of Biophysics, Peking University School of Basic Medical science 六 单位点竞争结合实验 *单位点竞争结合实验主要用于检测各种化合物是否已知受体的拮抗剂或激动剂，以及比较它们和受体的亲和力大小。 *反应系统含定量受体制剂、定量标记配基、及逐步递增的抑制剂。 *在药物及药理学领域，这类试验可用来研究药物作用机理、进行药物筛选、发现新药等。 *在此类实验中，放射配基是受体的已知配基，对亚型无选择性, 而研究的对象则是各种非标记的配