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维普资讯 分析化学 (FENXIHUAXUE) 评述与进展 第 1期 第35卷 146—152 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 2007年 1月 ，“”·”～·… ·‘…。‘”一。“”…‘。””! 评述与进展 ；，．．．．…．·…．．…．·…．·．．．．·…．·”-．▲ 蛋 白质组学中质谱分析前的预富集研究进展 张莉娟 ， 陆豪杰 ， 杨芄原 (复旦大学化学系，上海200433) (复旦大学生物医学研究院，上海 200032) 摘 要 回顾了近年来生物质谱分析鉴定蛋白质及多肽前的预富集方法研究进展，其中包括固相微萃取富 集方法、靶上富集方法、电洗脱富集方法以及磷酸化蛋白质／肽段的富集方法，总结和归纳了各种方法所具有 的优缺点，引用文献59篇。 关键词 生物质谱 ，蛋白质 ，多肽，预富集 ，磷酸化 1 引 言 自80年代以来一系列新的软电离技术如快原子轰击电离 ]、基质辅助激光解吸电离 、电喷雾电 离 ]等发现后，生物质谱技术迅速发展，已成为现代科学研究前沿的热点之一。而其中又以基质辅助 激光解吸质谱(MALDI．MS)和电喷雾电离质谱(ESI．MS)应用最为广泛。基质辅助激光解吸质谱灵敏度 高、可操作性强且对生物样品中的无机盐和缓冲溶液具有较好包容性；电喷雾电离质谱选择性好、分析 质量范围宽、样品消耗量小、易于与各种色谱联用。在生物样品的处理中常常需要用到非挥发性的盐 ， 用于为细胞营造无毒的环境，稳定溶剂化的样品及维持酶的活性等。此外，许多用于分离生物分子的分 离方法也需要高浓度的盐和缓冲溶液 ’。但是，样品处理及分离过程中所用的NaCl、十二烷基磺酸 钠、盐酸胍、尿素、甘油、二甲基亚砜等都会影响后续质谱高灵敏的分析 J。因为这些不挥发的低分子 量污染物会导致复杂加合物的形成，增加噪音及造成明显的信号抑制 J。此外，在复杂的组织或细胞 蛋白质组中，与疾病和信号传导相关的蛋白质往往是属于低丰度的蛋白质，这些重要的蛋白质由于本身 存在的量极少而很难得以有效鉴定 J。因此，对蛋白质／多肽样品的预富集处理将是 MALDI．MS或 ESI—MS得到高质量质谱图的前提，也是成功鉴定蛋白质的关键。所以本文着重综述了蛋白质／多肽在 MALDI-MS或ESI—MS鉴定前的样品预富集除盐方法的研究进展。 2 生物样品的预富集方法 2．1 固相微萃取富集方法 通常采用的透析、反相高效液相色谱、体积排阻色谱等富集除盐方法，由于步骤繁多易造成样品的 大量损失，不适用于痕量蛋白质／多肽样品。固相微萃取的方法运用各种载体通过不同的相互作用直接 从样品溶液中对蛋白质／多肽进行富集除盐 ，从而免去了最容易造成样品损失的洗脱步骤或者仅需极少 量的洗脱液洗脱样品，既缩短了分析时问叉减少了样品损失，在分析痕量蛋白质／多肽时体现出优越性。 2．1．1 层析介质固相微萃取法 Winston等 发明了对于MALDI．MS和ESI．MS均适用的能同时完成 痕量样品的富集、除盐和洗脱过程的方法。该方法在蛋白质溶液中加入悬浮于甲醇或乙醇中的反相 C4／C18层析介质，利用疏水作用对蛋白质样品进行富集并除盐。此方法简便、费用低廉、样品损失少、 2006-03—30收稿；2006-08．18接受 本文系国家 自然科学基金 (No、上海市重大基础研 究 (No．04D14005)、上海市青年科技启 明星计划 (A类) (No．06QA140O4)和国家自然科学基金重点(No资助项 目 E-mail：luhaojie@shmu．edu．cn 维普资讯 第 1期 张莉娟等：蛋白质组学中质谱分析前的预富集研究进展 147 耗时短(小于30min)，适用于能