hCMSC体外培养的优化及生物学特性的初步分析.pdfVIP

徐小霞等 hCMSC体外培养的优化及生物学特性的初步分析 第 11期 · 1009 · · 免疫学技术与方法 · hCMSC体外培养的优化及生物学特性的初步分析 徐小霞 李 芳 苗宗宁 孙 静 许云云 张学光 (苏州大学医学生物技术研究所，苏州215007) 中国图书分类号 R392．1 文献标识码 A 文章编号 1000．484X(2009)11．1009．06 [摘 要] 目的：探索从人胎盘绒毛组织体外分离培养获得问充质干细胞 (hCMSC)和 hCMSC体外有效扩增的方法，并对 hCMSC生物学特性作初步分析。方法 ：免疫组织化学染色确定胎盘绒毛组织中间充质干细胞的组织分布，选取相应的绒毛组 织和采用Ⅳ型胶原酶消化法，获得细胞悬液，进行原代传代培养；流式细胞术检测细胞表面标志，采用细胞计数和 M3T法分析 细胞的增殖；叔丁对甲氧酚(Butylatedhydroxyanisole，BHA)和 DMSO联合诱导hCMSC向神经元样细胞分化；RT-PCR分析fit3基 因表达。结果：免疫组织化学染色结果显示，胎盘绒毛中轴血管周围富有 CD105、CD90阳性的问充质干细胞，采用机械分离和 Ⅳ型酶消化法获取绒毛层富含hCMSC的组织细胞；bFGF是 良好的hCMSC体外增殖因子 ，而 FL对人胎盘绒毛层间充质干细胞 具有更明显的促增殖作用 ；体外扩增的hCMSC高表达CD73、CD90、CD105，低表达CD14、CD34、CD45、HLA—DR，以及免疫负性调 控分子 PDL-1呈现表达 ，并且具有向神经元样细胞分化的潜能。结论：胎盘绒毛组织中存在低免疫原性的间充质干细胞，bFGF 和~ (nt3hgand)~有效促进胎盘绒毛层问充质干细胞体外增殖且保持其分化潜能。 [关键词] 胎盘绒毛；间充质干细胞；培养条件 ；FL Optimizationoftheculturesystem forthemesenehymalstem cellsfrom theplacenta chorioninvitroand thepreliminaryana lysis0fitsbiologicalcharacterization XUXiao—Xia，Ll ，!g，MIAOZong-Ning，SUNring，XUYun—Yun，ZHANGXue—Guang．InstituteofMedicalBiotechnol— ogy，Soochow Univenity，Suzhou215007，China lAbstract] Objective：TooptimizetheculturesystemforthemesenchymalstemcellsfromthePlacentaChofion(hCMSC)invitroby addingtheselectedcytokinestoamplifythehCMSCeffectively，withfurthermoresomepreliminaryanalysisofhtehCMSCperfomred．M ethods： Immunohistochemistrywasappliedtoshowhtelocalizationofthemesenchymalstem cellswihtinhteplacentachorion，thenthecorresponding partofchorionWaSdigestedbycollagenaseⅣ togetthecellsuspensionofrprimarycultureandsubculture；FlowCytometrywasusedtodetect thesurfacemarkerofhCMSC，whoseproliferationwasdetectedbydirectcellcountingnadtheM3T method；thenButylatedHydroxyaniosle (BHA)，nadDMSOwasusedeombinedlyastheinducerinthedifferentiationofhtehCMSCtotheneuronlikecells，whichwasthendetectedby InmlmlOfluorescencestainingofrtheexpressionofNSE；finallyRT-PCRWas usedtodetecttheexpressionoffit3．Results：Theresul