PCR-RFLP分析桉树人工林土壤微生物的群落结构.pdfVIP

基因组学与应用生物学，2QO9年，第28卷，第5期，第859—864页 GenomicsandAppliedBiology，2009，Vo1．28，No．5，859—864 研究报告 ResearchReport PCR．RFLP分析桉树人工林土壤微生物的群落结构 段思蒙 1,2,3 申佩弘 1,2,3 潘莉莉 12,3 李双喜 2,3 蒋承建 ∞ 武波 2,3 1广西大学生命科学与技术学院，南宁，530005；2微生物及植物遗传工程教育部重点实验室，南宁，530005；3广西亚热带生物资源保护利用重 点实验室，南宁，530005；4广西民族大学化学与生态工程学院，南宁，530005 通讯作者，wubogxu@yahoo．corn．cn 摘 要 本研究利用限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)~D16SrDNA序列分析相结合的方法研究了广西 南宁高峰林场人工桉树林中土壤微生物的群落结构。通过采用直接法提取桉树人工林土壤中微生物总 DNA，构建细菌的 16SrDNA克隆文库，从中随机挑取了192个阳性克隆进行检测，分析显示 188个阳性克 隆子确定含有 16SrDNA并分归为 52个不同的类群 OTUs，随机挑取其中35个克隆进行测序，并构建了系 统发育进化树。研究结果表明：桉树人工林土壤中细菌种类较为丰富，含有大量的未培养微生物，进一步的 序列分析表明桉树人工林土壤中占优势的类群分别为Acidobacteria(40％)和Proteobacteria(27％)。本研究对 桉树人工林土壤微生物群落结构进行了研究，为进一步研究桉树人工林环境质量变化提供基础资料。 关键词 桉树，16SrDNA，PCR—RFLP，群落结构 PCR—RFLPAnalysisonEdaphonCommunityStructureinEucalyptusPlan- tation DuanSimeng ShenPeihong PanLili LiShuangxi JiangChengjian WuBo 1CollegeofLifeScienceandTechnology，Nnaning，530005；2TheKeyLaboratoryofMinistryofEducationforMicrobialnadPlantGeneticEngineer— ing，Nnaning，530005；3GuangxiKeyLaboratoryofSubtropicalBioresourceConservationnadUtilization，Nnaning，530005；4College ofchemistry nadEcoloyg Engineering，，Nanning，530005 Correspondingauthor，wubogxu@yahoo．corn．cn DOI：10．3969／gab．028．000859 Abstract Inthisresearch，weinvestigatedtheedaphoncommunitystructurefrom Gaofengforest—farm Eucalyptus plantationinGuangxiNanningbyPCR—RFLPtechniqueand16SrDNA sequenceanalysis．TotalDNA ofmicroor— ganism inEuca／yptusplanattionwasextractedbyusingthedirectmethod,thenweconstructeda16SrDNA cloneli． braryofthesoilmicrobes．A totalof192positivecloneswereradomlychosenrfom theclonelibrarytobeexam． ined．ThePCR—RFLPresultshowedthat188positiveclonesdetemr inatelycontained 16SrDNA andtheywent backto52differentoperationaltaxonomicunits(OTUs1．Wealsoradomlychose35clonesamongthemtosequence andconstructedphylogeneticdevelopmentrtee．TheresultsindicatedthatthebacteriaspeciesinEucalyptusplanat- tionsoilarerelativelyabundance．Furthersequenceanalysis