湿态三角褐指藻UTEX 640中大规模提取十二碳五烯酸(EPA)研究.pptVIP

摘要 引言 实验方法与结果讨论 藻种培养与收获 藻泥直接皂化抽提脂肪酸 脲素包埋 高效液相色谱分馏多不饱和脂肪酸 脂肪酸的纯度与产率分析 结论 Page ? * LOGO 海洋生物技术 * * E. Molina Grima, A. Robles Medina*, A. Giménez Giménez M. J. Ibánez González 湿态三角褐指藻UTEX 640中大规模提取十二碳五烯酸(EPA)的研究 组长：葛鹏鹏 文献：帖航 翻译：张轩昂，刘岩，张强利 PPT：贾冬冬 主讲：李正浩 EPA即全顺式-5，8，11，14，17-二十碳五烯酸是一种多不饱和脂肪酸，属于ω-3族多烯长链脂肪酸，无色，无味，常温下以液态形式存在，易溶于有机溶剂。具有重要的生物学功能，在预防和治疗人类的心脑血管疾病、抗肿瘤、抑制肥胖、抗炎症等方面具有重要的作用。 三角褐指藻常见的形态有卵形，梭形和三出放射形，这三种形态在不同的生长环境下可以相互转变。三角褐指藻的生长条件：（1）三角褐指藻对盐度的适应范围很广0.9-9.2%，最适盐度为2.5-3.2%。（2）最适温度为10-20℃。（3）适应的光照强度为1000-8000lx。（4）在pH值7-10的环境下均能繁殖生长。 采用下列三个步骤从三角褐指藻中提取多不饱和脂肪酸（EPA,20：5n-3）：从湿态藻泥中直接皂化并提取脂肪酸，多不饱和脂肪酸（PUFA）的浓缩，高效液相色谱分离EPA。湿态藻泥的直接皂化使用KOH—乙醇（96%，v:v）溶液（1h，60℃），可以提取纯度为91%的EPA。多不饱和脂肪酸使用尿素—甲醇溶液进行包埋，尿素与脂肪酸的比例为4:1，28℃结晶，浓缩率可达到1.5（55.2/36.3），EPA的回收率为79%。通过液相色谱纯化的EPA纯度可达到95.8%，使用反相色谱柱（C18，内径4.7cm x 30cm），流动相为甲醇—水（1%，AcH）80:20w/w，高效液相色谱可回收上样液中97%的EPA。通过这三个下游过程可回收三角褐指藻中70%的EPA。最后，对EPA的投产进行了投资预算，一次高效液相色谱上样635mg的多不饱和脂肪酸可以纯化出326mg高度纯化的EPA（2.46g?d-1）。 ω-3家族的多不饱和脂肪酸EPA（20:5n-3）具有重要的生物学功能，在预防和治疗人类的心脑血管疾病、抗肿瘤、抑制肥胖、抗炎症等方面具有重要的作用，因此EPA越来越受到人们的关注。 制药和临床应用需要大量的高纯度多不饱和脂肪酸，但是目前，生产的高纯度的营养价值高不饱和脂肪酸还不能满足临床应用，这严重阻碍了ω-3系类的多不饱和脂肪酸在预防和治疗疾病中实验考查。因此，快速可靠的不饱和脂肪酸提纯方法被迫切的需求。 许多的微澡中富含多种多不饱和脂肪酸。他们商业化生产脂肪酸与鱼甘油做脂肪酸的来源相比的优势在于，藻类可以利用一个低价值的可控的生产过程来提高细胞内具有生物活性脂肪酸的含量。三角褐指藻因为它生长迅速，所以它是EPA的理想来源。户外管道式光合反应器每天可生产EPA47.8 mg?d- l?L- l。还有一个额外的优势是 二十二碳六烯酸和花生四烯酸含量少，甚至可以忽略不计，这个重要的优势可以简化EPA回收的过程。 有关于从微澡中提取EPA的研究，发表的很少。Cohen和Cohen (1991)从紫球藻中获取EPA的用了五个步骤：脂质提取；糖脂与磷脂的分离，糖脂类部分的甲酯化；尿素包埋法吸附甲基酯脂肪酸；常压反相色谱法分离。Cohen等人用其相似的一种办法从蓝绿螺旋藻中提取出了纯度为90%γ-亚麻酸。 本文作者以前开发了一种从海洋等鞭金藻和三角褐藻中三步分离高纯度提取EPA的方法。三步分别是（1）从直接皂化的冻干生物质中提取脂肪酸；（2）尿素包埋法分离多不饱和脂肪酸；（3）通过高效液相色谱法半制备分离多不饱和脂肪酸。这文研究的是用三步分离法从三角褐指藻中提取EPA，另外，本文试图研究了扩大利用高效液相色谱法制备EPA的产量。 使用户外管道式光合反应器(200L）培养三角褐指藻（稀释率为0.04h-1），收获时4000rmp，-18℃离心。藻泥中含有20.9±1.3％的干藻粉，平均总脂肪酸含量为9.4％。 480g藻泥（100g干藻粉）+160gKOH +96％乙醇（乙醇：干藻粉=14~95ml?g-1） 氮气保护 60℃搅拌浸提1h以破碎细胞 过滤，滤渣用2L乙醇（96%）洗涤两次 上清+2L水，用4L正己烷分五次萃取去除不可皂化物质（有机相） 加2L正己烷分八次萃取回收游离脂肪酸 HCl（1:1）将水相pH调至1.0 Ethanol/dry和Ethanol/wet换算参照Bligh 和Dyer‘s 实验