原儿茶酸促进人脂肪干细胞体外增殖研究.pdfVIP

PIll,：恭骚脚枷 WWW．pibb．ag．cn 原儿茶酸促进人脂肪干细胞体外增殖的研究· 王晗1’ 关水D 刘天庆1)”朱艳霞1) 马学虎D崔占峰z) OXl (吹连理工大学干细胞与组织工程研发中心，大连1 Science，Oxford 3PJ，uz) 16024；自Departmento／Engineering University,Oxford 摘要为了寻找能够促进干细胞增殖的药物，观察了中药益智仁似加i，妇舛”^似曲中提取的原儿茶酸对人脂肪干细胞体外增 殖的影响，并对其作用机制进行了初步的探讨．人脂肪干细胞能在体外分化为神经元样细胞，并对凋亡的PC．12细胞起到保 护作用．原儿茶酸能够促进人脂肪干细胞的增殖，且呈现明显的剂量依赖性和时间依赖性．流式细胞术检测细胞DNA含量 的结果显示，原儿茶酸处理组细胞S期所占比例明显增加，其中，1．5mmol／L原儿茶酸处理组细胞S期所占比例与对照组相 比增加2倍以上．同时，该组细胞G2／M期所占比例明显增加，GO／Gl期所占比例明显下降．蛋白质免疫印迹结果显示， 1．5 DI--siRNA转染显著抑制了原儿茶酸对人脂肪干 mmol／L原儿茶酸处理组细胞周期素Dl(cyclinDI)的表达明显升高．cyclin 细胞体外增殖的促进作用．流式细胞术检测细胞表面标志物，成骨诱导和脂肪诱导的结果显示，原儿茶酸处理后，人脂肪干 细胞仍保持间充质干细胞多分化潜能的特性．上述结果提示，原儿茶酸有可能在人脂肪干细胞介导的干细胞移植治疗中发挥 作用． 关键词原儿茶酸，脂肪干细胞，增殖，细胞周期，细胞周期素Dl(cyclinD1) 学科分类号Q253，R961 脂肪干细胞是脂肪组织中一类多能干细胞，其 参、芙蓉(HibiscussabdariffaL．)、益智仁似加inia 在体内外特定的条件下，可分化形成多种细胞类 型，如脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、神经细 肿瘤细胞生长和诱导HL60白血病细胞、HepG2肝 胞、肌肉细胞等【l】．由于脂肪干细胞易于分离，且 癌细胞凋亡的作用liszt91．但其对干细胞增殖的影响 可以在体外条件下大量扩增和长期稳定培养fl’习， 未见报道．本研究观察了人脂肪干细胞体外条件下 因此，可以作为组织再生工程理想的细胞源． 向神经细胞的诱导分化和对PC．12细胞的凋亡保护 在细胞移植组织重建的过程中，需要为新组织 作用，以及益智仁中提取的原儿茶酸对人脂肪干细 的形成提供足够的细胞来源．但是，多数情况下， 胞体外增殖的影响，并对原儿茶酸的作用机制进行 移植的细胞不能很好地存活和增殖【3‘41，因此，找 了初步的探讨． 到合适的药物或生长因子等来促进移植的干细胞增 1材料与方法 殖对于提高干细胞移植治疗的效果至关重要． 研究发现，一些生长因子(如表皮生长因子 1．1试剂 EGF，碱性成纤维细胞生长因子bFGF)t5叼，Wnt相原儿茶酸提取自益智仁[15,20]，经高压液相色谱 关分子Is,9]和神经递质如^y．氨基丁酸(GABA)、谷氨分析纯度大于98％．细胞计数试剂盒(CCK-8)购自 日本株式会社同仁化学研究所．碘化丙锭(PD和 酸(glutamate)t峨ll】等可以诱导干细胞增殖．中药龟 fromAnnexin saponin 板(tortoiseshell)，三七总皂甙(total miltiorrhiza司．RNA酶购自宝生物工程有限公司．抗人细胞 Bge) №notogime，动和中药丹参(Salvia