先天性巨结肠病因与RET-GDNF信号通路的初步研究.pdfVIP

方 法 免疫组化:21例HD患者正常段、移行段、痉挛段全层肠标 本，常规福尔马林固定，石蜡包埋，苏木素一依红染色(H.E.)证 实取材准确。免疫组化使用抗Ret、抗GDNF及磷酸化酪氨酸(p -Tyr)抗体，生物素一亲合素一碱性磷酸酶系统。GDNF基因 mRNA表达以RT一PCR半定量分析:其中11例患者不同肠段全 层标本，用Trizol提取试剂提取肠组织总RNA，反转录合成cDNA 第一链，扩增GDNF产物，检测肠组织GDNF基因mRNA表达。 对照组采用5例年龄匹配非HD患者的结肠标本。 结 果 在对照组结肠与HD正常段肠管肌间丛、粘膜下丛神经节细 胞胞浆可见抗Ret、抗GDNF强阳性染色;移行段神经节细胞胞体 较小，多呈团状分布，神经丛不典型，染色强度弱于正常段神经节 细胞;浆膜下偶见散在分布的Ret阳性神经节细胞;痉挛段肌间 丛、粘膜下丛无Ret,GDNF阳性细胞;在HD正常段、移行段肠管 粘膜腺体上皮细胞胞浆可见GDNF红染，多位于腺腔上中部，肌间 丛内细胞间有抗GDNF阳性染色。在对照组结肠与正常段肌间丛 神经节细胞有p一Tyr中等强度阳性染色，移行段小神