κ-卡拉胶寡糖的反相离子对-超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱研究.pdfVIP

第37卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究报告 第 11期 2009年 11月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 1590～1595 K．卡拉胶寡糖的反相离子对一超高效液相色谱一 四极杆-飞行时间质谱研究 高 洋 陈海敏 徐继林 陈德莹 严小军 (宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室，宁波 315211) 摘 要 建立反相离子对一超高效液相色谱 (RPIP—UPLC)和电喷雾离子源一四极杆一飞行时间质谱 (ESI—Q—TOF— MS)联用技术快速分离鉴定硫酸寡糖的方法。以20mmolfL庚胺 (pH4)为离子对试剂，25％庚胺 甲酸盐纯水 溶液 (A)和25％庚胺 甲酸盐 甲醇溶液(B)为梯度洗脱溶剂，，c卡拉胶寡糖通过BEHC 反相柱分离后，分别在 正 、负离子模式下进行四极杆一飞行时间质谱分析。结果表明，聚合度为3～45的，c一卡拉胶寡糖在BEHC柱 上得到很好的分离，从每一个色谱峰对应的质谱图中可以准确获得直至27糖的各寡糖结构信息 ，均为奇数 糖，与聚丙烯凝胶电泳结果吻合。所得的寡糖断裂规律对卡拉胶寡糖的快速鉴定和结构解析具有重要意义。 关键词 一卡拉胶 ，反相离子对色谱一超高效液相色谱，电喷雾离子源一四极杆一飞行时间质谱，聚丙烯凝胶电泳 1 引 言 卡拉胶(Calwageenan)是从红藻(诸如角叉菜、杉藻、麒麟菜)中提取的水溶性的硫酸多糖 ¨，称为类 肝素多糖，是一种硫酸半乳聚糖，均是 以1，3 一D半乳糖和 1，4-oz—D半乳糖交替连接形成骨架结构，根 据半乳糖 中是否含有 内醚键以及半乳糖上硫酸基的数量和连接位置不同区分为7种类型：，c一，一， 0一，A ，一和 ．。一般常见的卡拉胶为 ，c一(A—G4S)， (A2S．G4S)和 A．(D2S6S—G2S)卡拉胶 。研究发 现，卡拉胶本身具有特殊的医疗作用，其降解产物卡拉胶寡糖的活性研究也已得到充分的开展，如抗凝 血、抗肿瘤、抗病毒等，且寡糖的活性优于多糖 。 目前，有关卡拉胶的研究主要集中于其分子结构和生物功能之间的关系_8J。但是，由于卡拉胶分 子结构单元的不均一性和硫酸基的不稳定性，很难对糖骨架及其连接 的修饰基 团进行详细的描述，给其 结构分析带来困难。通过原子快速轰击电离或者 cf等离子体解析肝素寡糖结构已有报道_9 ，但这 两种方法均发现大量硫酸基的缺失现象。随着软电离技术发展，电喷雾质谱技术(ESI．MS)和基质辅助 激光解吸附质谱技术 (MALDI)被用于硫酸多糖的结构分析，但是硫酸基很容易被 HSQ-、NaSO3-和 NaHSO 取代 ，因此，准确的结构信息很容易丢失 12]。Aristotelis等 利用 IP—RPLC／ESIMS在正离子模 式下，对 ，c．卡拉胶寡糖进行分析，成功地将 ，c．卡拉胶寡糖分离，并得到聚合度4～18的偶数寡糖的ESI— MS结构信息。继而，IP—RPLC．ESIMS的方法被用于肝素寡糖的结构分析 。 本研究以，c-卡拉胶寡糖为研究对象，利用反相离子对．超高效液相色谱一四极杆一飞行时间质谱(RPIP- UPLC—Q．TOF—MS)系统，进一步优化实验条件 ，使聚合度3—45的K-卡拉胶寡糖在反相色谱柱上获得成功 分离并准确获得聚合度 3～27的寡糖的质谱信息，为硫酸寡糖的进一步研究提供了有效的工具。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 ACQUITY超高效液相色谱分析系统、Q—TOFPremier高分辨四极杆与飞行时间串联质谱仪、ACQU— ITYUPLCBEHC1s色谱柱(1OOmm×2．1mm，1．7 m)，MassLynx4．1数据处理系统 (美国Waters公 司)；BG．P0wer600型电泳仪、BG—verMINI型垂直电泳槽(百晶公司)；WD-9405B脱色摇床(北京六一仪 器厂)；R一215旋转蒸发仪(Btichi公司)；FD5508冷冻干燥仪 (SIM公司)；W-0系列恒温水浴锅、S-212 系列恒速搅拌器(上海申顺公司)；超纯水系统(法国Millipore公司)。 2009-04493收稿；2009-06—13接受 本文系教育部长江学者与创新团队项 目(No．IRT07