中国明对虾Vg和ALF基因启动子克隆与活性分析.pdfVIP

4 摘 要 摘 要 对虾是我国重要的水产养殖品种之一，但近年来各种疾病频繁发生，这对对虾养殖 业造成了巨大的经济损失。卵黄蛋白原（vitellogenin，Vg）和抗脂多糖因子 Anti-lipopolysaccharidefactor ALF （ ， ）在对虾生长和抗菌免疫过程中起着重要作用。研 究和了解对虾卵黄蛋白原和抗脂多糖因子的调控机理，对对虾人工育苗和养殖产业的发 展具有重要的理论价值和现实意义。 本文以中国明对虾为研究对象，主要研究内容如下： 1 Vg 2114bp ALF 第 部分：通过DNA步移法克隆了1100bp的 基因启动子区和 的 基因编码区及上游调控序列序列。分析发现，ALF 基因含有两个大小分别为365 bp 和 319bp的内含子，而启动子区为738bp。利用多个网站对核心启动子以及顺式调控元件 进行预测，结果显示，两条基因都含有评分为1的+1位和一个TATA box，未发现有CAAT box和GCbox。此外，在上游调控区都存在着多个可能影响启动子转录活性的顺式作用 元件，如NF-κB、YY1和SP1等转录因子结合位点。 2 Vg ALF 第 部分：截取不同长度 基因和 基因启动子片段（P 和P ）构建荧光表 Vg ALF 达载体，转染SF-9 细胞来验证其功能。结果表明：4 个P 以及4个P 驱动的pEGFP Vg ALF SF-9 17β 表达载体在 细胞内都不能表达荧光，且前者在 -雌二醇的刺激作用下也不能表 达荧光。但后者在脂多糖或β-1,3葡聚糖的刺激下，部分载体能在细胞中表达绿色荧光 蛋白。这说明P 属于诱导型启动子。 ALF 关键词：中国明对虾；卵黄蛋白原；抗脂多糖因子；启动子；顺式作用元件 I Abstract Abstract Abstract AAbbssttrraacctt Shrimp is one of the most important aquaculture species in our country. But recent years, various diseases occur frequently which caused great economic losses to shrimp farming. Vitellogenin and anti-lipopolysaccharide factor play important roles in the process of growth and anitbacterial immunization of the shrimp. Understanding the regulation mechanism of vitellogenin and anti-lipopolysaccharide of shrimp are meanful for ar