致弱球虫卵囊免疫鸡血清抗体的动态变化研究.pdfVIP

试验报告 吉林畜牧兽医增刊 致弱球虫卵囊免疫鸡血清抗体的动态变化研究 黄海龙．李显鹏 (吉林农业大学动物科技学院，吉林长春130118) 【摘要】采用起声波，化学致弱卉0致弱柔嫩艾美耳球虫杂交F2株卵囊．将致弱的卵囊分别饲喂从肉鸡 X 进行免疫．首免7日龄．二免14日龄．首免和二免剂量分别为410’、8×103、16×10’个／只。二免后7 攻虫．卉4量为5×105．实验期间每周采血．建立检测鸡血清抗体OD值的问接酶联免疫吸附试验(EUSA)． 按照间接ELISA实验方法的程序确定抗原最佳包被浓度、酶结合物工作浓度、被检血清最佳稀释度。采用 上述条件探讨致弱杂交卵囊免疫鸡后血清抗体OD值的动态变化规律．结果表明：建立的ELlSA法可应用 于鸡球虫疫苗免疫的抗体检测．揭示了超声波致弱球虫卵囊和化学试剂致弱球虫卵囊免疫抗体消长规律． 为进一步的球虫免疫研究奠定了基础一 【关键词1柔嫩艾美耳球虫：致弱：超声波：化学致弱剂：ELISA 1前言 柔嫩艾美耳球虫(Etenella)是球虫病爆发中致病性最强的虫种之一fI】，主要侵害鸡的盲肠．通过 裂殖体在盲肠上皮细胞中大量增殖．破坏肠粘膜，引起肠管发炎和上皮细胞崩解，鸡表现为排血便．严 重的导致死亡，给养鸡业带来巨大的损失。目前，对本病的防治主要有药物防治法和疫苗防治法。其中 药物防治球虫病主要是通过在饲料或饮水中拌混预防或治疗剂量的抗球虫药来达到防治球虫的作用。但 长期使用药物防治会造成耐药株产生【”．防治成本昂贵。随着科学技术的进步，使用疫苗来预防鸡球 虫病的发生就成为既科学又经济的防治方法．具有良好的发展前景。艾美耳球虫在肠道的发育使宿主迅 在国内外研制开发的鸡球虫病疫苗有强。球虫活苗是实际生产中唯一可替代抗球虫药物以控制球虫病的 疫苗毒株虫苗、弱毒株虫苗和球虫基因工程苗等。由于活的强毒株虫苗未经致弱，如果免疫量不准确或 免疫接种经鸡传代后卵囊的数量越来越多。有可能导致球虫病的爆发。因此，有必要研究球虫病疫苗的 致弱方法。当前．对强毒株球虫卵囊的致弱方法有三种：理化致弱法．鸡胚传代致弱法和早熟卵囊选育 法。理化致弱是通过对卵囊进行冷却、加热、超声、辐射、离子辐射等物理性处理而使之减毒。我们将 柔嫩艾美耳球虫不同地理株杂交砣株卵囊进行化学致弱剂致弱并进行了免疫保护性试验．为球虫卵囊 疫苗致弱方法的研究奠定了基础[4·5’．为了观察致弱杂交卵囊免疫后鸡体内血清抗体的变化规律，建立 2材料与方法 2．1 材料 2．1．1 标准阳性、标准阴性血清 购自中国农业科学院上海兽医研究所。 2．1．2 E．tenel／a杂交株卵囊 由吉林农业大学寄生虫研究室提供． 2．1．3 主要器材 WFZUV-2102 PCS型紫外可见分光光度计(龙尼柯上海仪器有限公司)，酶联免疫检测仪(DG一3022 ．16． 吉林畜牧兽医增刊 试验报告 3K30型冷冻离心机(德国制造)，电热恒温水浴箱(上海医疗器械厂)。 2．1．4 药品与试剂 2．2 方法 2．2．1 可溶性卵囊抗原制备 参照文献[6，7】的方法．并适当改进．具体步骤是：将杂交株卵囊加水离心除去重铬酸钾，用 300 000 mL／L的次氯酸钠液漂浮10 min，加人大于其10倍量的pH9．6碳酸盐缓冲液，离心4次(3r／rain)， 弃去上清液．用上述碳酸盐缓冲液稀释．超声波粉碎仪处理．并注意用冰块致冷，直至90％以上的卵 000 r／min离心30 囊破裂为止：在液氮中反复冻融5次．放置于4℃冰箱l一2d．以10 m