肉制品中苯并芘快速检测方法.docxVIP

肉制品中苯并[a]芘的快速检测方法固相萃取柱：HiCapt Benzo Plus苯并芘专用柱1000mg/6mL液相色谱柱：HiSep C18-T 150 mm×4.6 mm i.d., 5 μm本文应用维泰克科技（武汉）有限公司的HiCapt Benzo Plus苯并[a]芘专用固相萃取柱，开发了肉制品中苯并[a]芘的快速检测方法，该方法具有以下特点：专利创新的苯并[a]芘专用萃取填料，有效去除中性脂肪和维生素等基质干扰回收率稳定、重现方法简单、快速、节省溶剂适用于烧烤、油炸、烟熏等肉制品中苯并[a]芘的快速检测1. 样品处理：1.1 样品提取：取50克样品切碎混匀，从中准确称取1.0g样品，加入5mL正己烷，匀浆1min，超声提取5min，4000r/min离心2min，收集上清液；残渣再加入3mL正己烷，涡混1min，超声提取2min，离心2min，合并两次提取液，待净化。1.2 固相萃取柱净化：HiCapt Benzo Plus苯并芘专用柱(1000mg/6mL)（1） 活化：在HiCapt Benzo Plus柱中依次加入5mL丙酮，2 mL正己烷活化。（2） 萃取：将待净化液加入HiCapt Benzo Plus柱中（在柱中正己烷液面为2mm时上样，此过程不要使柱干涸），流出液弃去。（3） 清洗：待上样液完全流出后，用6mL的异丙醇/正己烷（v/v=1:4，体积比）溶液淋洗，淋洗液弃去，将小柱抽干。（4） 解吸：3mL丙酮解吸，收集解吸液。（5） 吹干及定容：解吸液40℃氮气吹干，加入异丙醇200μL涡混1分钟，（定容体积可根据仪器的检出限调整为100-500μL），待上机分析。2.色谱条件：色谱柱：HiSep C18-T (150 mm×4.6 mm i.d.，5 μm)；流动相：乙腈/水溶液(88:12，v/ v)；流速：1 mL/min；荧光检测器：激发波长：384nm 发射波长：406nm；柱温：40℃；进样量：10 μL。苯并[a]芘标准溶液的配制储备溶液的配制：标准储备液1：称取苯并[a]芘5mg，用乙腈定容至10mL, 配制成500ng/mL的标准储备液供 HPLC分析；标准储备液2：称取苯并[a]芘5mg，用正己烷定容至10mL，配制成500ng/mL的标准储备液供SPE试验；将上述储备液密封后放置于4℃冰箱中避光保存，至少6个月内稳定。工作溶液的配制： 取苯并[a]芘标准储备液1用乙腈稀释, 供HPLC分析；取苯并[a]芘标准储备液2用正己烷稀释供SPE试验。标准曲线：将500ng/mL的苯并[a]芘标准储备液1用乙腈稀释，配制0.5、1.0、20、40ng/mL的溶液，绘制标准曲线。结果标准曲线与检出限取0.5，1.0，20.0，40.0μg/L 4个浓度的系列标准溶液进样分析，以样品浓度为Y轴、峰面积为X轴进行线性回归，所得标准曲线如图1。线性范围为0.5~40μg/L,相关系数为0.99999。Y=aX+b（a=1.5008e-5，b = -6.0259e-3）R=0.99999图1 苯并[a]芘的标准曲线检出限：以3倍信噪比计算本方法苯并[a]芘的检出限为0.06ug/kg。回收率和精密度表1：熏烤火腿中苯并芘的回收率和日内、日间精密度分析物样本添加水平(μg/kg)回收率 (%)RSD%日内(n=5)日间(n=3)苯并[a]芘熏烤火腿2.091.45.984.864.093.55.315.16 图2 熏烤火腿中4ug/kg苯并芘色谱图测试结果的表示苯并吡含量按下式计算： 式中：ω: 样品中苯并吡含量，单位为微克每千克（ug/kg）;c:从标准工作曲线得到的待测液中苯并吡的浓度，单位为ng/mL;V:待测液定容体积，单位为毫升（mL）；m:样品质量，单位为克（g）.注意事项：为了避免油脂中基质对色谱柱的污染，延长色谱柱寿命，建议在每天苯并吡实验结束后，用异丙醇1ml/min冲洗色谱柱1小时。过SPE的样品必须是正己烷体系，因此做添加回收实验时，苯并吡标准品必须用正己烷稀释，参考“3 苯并[a]芘标准溶液的配制”。维泰克科技维泰克科技·香港(00852· 北京(010 武汉(027)·郑州(0371) 69063755