菜花DNA的提取及二苯胺检测53141.pptVIP

实验 菜花DNA的提取及二苯胺检测 一. 实验目的 学习DNA提取的原理及方法。 掌握二苯胺方法检测DNA 。 二 .实验原理 [二苯胺鉴定DNA的化学原理] DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成ω-羟基-γ酮基戊醛，它再和二苯胺作用而呈现蓝色(溶液呈浅蓝色)。鉴定时溶液蓝色的深浅，与溶液中DNA含量的多少有关。 1．核酸分离提取的原则 1）应保证核酸一级结构的完整性 2）排除其他分子的污染 A． 核酸样品中不应存在对其有抑制作用的有机溶 剂和过高浓度的金属离子 B．其他生物大分子如：排除其他核酸分子的污染 2. 核酸提取的步骤 1）破碎细胞（材料不同，方法不同） 匀浆器，捣碎器，溶菌酶消化，碱裂解等。 2） 除杂质，提DNA 杂质：蛋白，多糖，脂类，DNase, RNA A. DNase的抑制：EDTA B.? 除RNA 酶法：加RNase 四. 实验步骤 （一）DNA提取 1，称取 菜花5g,用水清洗后，加入半勺石英砂粘磨,再加入10ml 0.14M/LNACL-0.15MEDTA该溶液，继续研磨至浆状， 2，上述研磨液加入２５％ＳＤＳ1毫升，６０℃保温，１０分钟（间或搅拌）．至溶液变粘稠。 3，上述溶液加入　５Ｍ／Ｌ的NaCL溶液5毫升　，搅拌３分钟　，再加入氯仿－异戊醇