实验7 细胞器分级分离.pptVIP

[目的要求] 1．掌握差速离心法和密度梯度离心法的原理。 2．熟悉哺乳动物细胞的细胞核、线粒体分离和 纯化的实验方法。 [实验原理] 球形颗粒的沉降速率取决于其密度、半径、介质黏度和离心力。 差速离心法（differential centrifugation）是将细胞匀浆在密度均一的介质中从低速到高速离心，较大颗粒先在低速离心时沉淀，再用高速离心沉淀上清液中的小颗粒物质，从而达到逐级分离细胞器的目的。 密度梯度离心法（density gradient centrifugation）是一定介质形成一连续或不连续的密度梯度，顶部的细胞匀浆在重力或离心力场的作用下分层、分离。 一般先通过差速离心法将细胞器初步分离，再进一步通过密度梯度离心法分离纯化细胞器。 细胞器的分离常通过组织细胞匀浆、分级分离和分析三个步骤完成。 分级分离方法有两种，即：差速离心法和密度梯度离心法。 [实验用品] 1．器具：玻璃匀浆器、低速离心机、高速冷冻离心机、天平、普通光学显微镜、1.5 ml Ep管、载玻片、10 ml滴管、冰盒、冰块、滤网、染缸、20 ml烧杯。 2．材料：大白鼠。 3．试剂：生理盐水、PBS、0.25 mol/L的蔗糖溶液、0.34 mol/L蔗糖-0.5 mmol