细胞凋亡在雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤中作用及其发生机制.docVIP

细胞凋亡在雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤中的作用及其发生机制 SYBR Green I 检测： SYBR GreenI 是一种只与双链 D N A小沟结合的染料，当它与 D N A双链结合时，发出荧光；从 D N A双链上释放出来时， 荧光信号急剧减弱。因此， 在一个体系内，其信号强度代表了双链 D N A分子的数量。它的缺点在于能与非特异性双链 D N A( 如引物二聚体) 结合，但其产生的干扰可通过熔解曲线分析得到解决。 荧光强度信号的对数与Ct值呈线性关系，与初始拷贝数呈反比。 标准曲线： RT-PCR 检测 mRNA水平 mRNA-----cDNA----PCR扩增 a. RNA 的提取，mRNA 的分离 b. RT c. qPCR 免疫组化检测 促/抑凋亡及基因表达蛋白水平 免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指将显示剂（荧光素，酶，金属离子，同位素等）标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体特异性反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定位，定性及定量测定的一项技术。其将抗原抗体特异性反应和组织化学的可见性有机的结合在一起，借助光学显微镜，电子显微镜和（或）荧光显微镜等的显像及放大作用，检测各种抗原物质（如蛋白质，多肽，酶，激素，病原体及受体等）的组织分布，表达丰度及细胞和亚细胞定位。 免疫组化