小型猪皮下埋羊肠腺减脂及其机理研究报告..docVIP

小型猪皮下埋羊肠腺减脂及其机理研究报告 1.实验目的 通过皮下埋羊肠腺对小型猪外观形态学、皮下脂肪组织、激素敏感酯酶（HSL）、乙酰辅酶A（ACC）、血清甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、机体瘦素(Lepin)和神经肽Y(NPY)含量影响，探究皮下埋羊肠腺减肥作用及其机理。 2.实验材料 小型猪（贵州香猪），普通级，体重28-32kg，由成都达硕生物科技有限公司提供，实验动物合格证号：scxk(111)2008-24。 3.实验仪器，试剂 手术针械，Φ0.25x25mm，苏州医疗用品厂生产 电子天平 FA1004，上海良平仪器仪表有限公司生产 非接触式红外额温计 UT300E，厦门特利尔电子科技有限公司生产 RT-PCR反应试剂盒，E10J0405，大连TaTkRa公司 紫外分光光度计，UV-1700，美国Beckman公司 PCR扩增仪，BioRad-MyCycler ，美国Bio-Rad公司 切片机，徕卡-2015，德国 TSJ-Q型全自动封闭式组织脱水机，ZHB1－12V－1.5，常州市中威医疗仪器有限公司 BMJ-Ⅲ型包埋机，TKY-BMB，常州市中威医疗仪器有限公司 PHY-Ⅲ型病理组织漂烘仪，ZMN-6802，常州市中威医疗仪器有限公司 Motic BA400显微摄像系统，麦克奥迪公司 Image-Pro Plus图像分析系统，Media Cybernetics,Inc.冰乙酸(AR级），批号：200709，规格：500ml瓶，成都科龙化工试剂厂生产；甲醛(AR级），批号：200813，规格：500ml瓶，成都科龙化工试剂厂生产。配制方法：分别量取95％乙醇663ml、甲醛90ml、冰乙酸45ml倒入烧杯中，再向其中加人纯化水102ml；充分混匀即可。 脱水试剂：95％乙醇（AR级），批号：201008，规格：25L/桶，成都科龙化工试剂厂生产；无水乙醇（AR级），批号：201025，200304，规格：500m1瓶，成都科龙化工试剂厂生产。配制方法：取95％乙醇用纯化水稀释配成 70％、80％和 90％乙醇溶液。 透明试剂：二甲苯（AR级），批号：201023，规格500ml瓶，成都科龙化工试剂厂生产. 封片试剂；中性树胶，规格：100g瓶，批号：200730，中国上海懿洋仪器有限公司。 盖玻片清洗液：重铬酸钾：（AR级），批号：200620，规格：500g瓶，成都市科龙化工试剂厂生产；浓硫酸：(AR级），批号：200714，规格：500ml瓶，成都市科龙化工试剂厂生产。配制方法：取纯化水500m1，加入重铬酸钾50.112g，搅拌、溶解、混匀，再向其中缓慢加入浓硫酸50ml，搅拌混匀即可。 3.实验动物分组 动物适应性喂养一周后，按体重随机分为针刺组（假手术组）、埋羊肠腺组和空白对照组。动物原始体重，身长，腰围，胸围见表-1。 表-1 动物分组原始数据 编号 性别 组别 体重（kg） 身长(cm) 腰围(cm) 胸围(cm) 1#2-1 ♂ 针刺组 28.0 82.0 81.0 68.0 2#1-1 ♂ 埋羊肠腺组 28.0 80.0 81.5 67.5 3#2-2 ♂ 针刺组 27.5 81.0 81.5 66.0 4#1-2 ♀ 埋羊肠腺组 27.5 80.0 80.0 66.5 5#3-1 ♀ 空白组 27.0 80.0 80.0 66.0 4. 施针方法 小型猪背部皮下脂肪针刺，埋羊肠腺。 5.观察项目 5.1一般观察 各组动物实验期间均用普通饲料喂养，自由摄食和饮水，针刺组和埋羊肠腺组动物分别于实验第1、3、7天针刺埋羊肠腺各一次。实验期间观察大鼠的体重、体长、Lee’s指数〔×103/体长〕、腰围、胸围等。 5.2 体温检测 兽用非接触型体温计测定动物体表温度。 5.3 动物血脂检测 分别于施针第1、3、7天各组动物采血一次：5ml一次性注射器耳缘静脉取血， 3000r·min-1离心，收集血清，检测甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白含量。 5.4 脂肪组织HSL和ACC检测 实验第八天，禁食过夜，各实验组动物次日第一批处死，迅速剖取腹部脂肪，Eleasa方法测定脂肪组织HSL和A