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SOD提取技术项目报告 项目名称：SOD的提取及测定 班级：生物技术0921 组员：孙玲玲，刘静，王瑜红，龚加慧 项目试验时间：2011.03.30 SOD的提取 背景知识 SOD（超氧化物歧化酶）是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充 SOD具有抗衰老的特殊效果。超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, EC1.15.1.1, SOD）是1938年Marn等人首次从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起，人们对SOD的研究己有七十多年的历史。1969年McCord等重新发现这种蛋白，并且发现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为超氧化物歧化酶。 1.组成结构 　　来源 　　的应用技术实验目的 掌握大蒜细胞SOD提取和活力测定方法。 ( 2 ) 熟悉有关生化技术的基本原理和基本操作。 2.实验原理 大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有丰富的SOD通过组织或细胞破碎后，可用PH为7.8的磷酸缓冲液提取出。由于SOD不溶于丙酮，可用丙酮将其沉淀析出。 3.实验步骤 细胞组织破碎：称取5克大蒜蒜瓣，置于研砵中研磨。 SOD的提取：破碎后的组织中加入2-3倍体积的0.05mol/L磷酸缓冲液（PH值=7.8），继续研磨20min，使SOD充分溶解到缓冲液中在5000rpm下离心15min,取上清液。 除去杂蛋白：上清液加入0.25体积的氯仿-乙醇混合液搅拌15min,5000r/min离心15min,得到的上清液为粗酶液。 SOD的分离：粗酶液中加入等体积的冷丙酮，搅拌15min,5000r/min离心15min,得到SOD沉淀。 测SOD酶的活性 ①取约0.2gSOD测酶活，剩下的放入真空干燥机内干燥 ②取10ml缓冲液溶解，取2只离心管离心，取上清液，编号为 0,1,2 ③在3个离心管中分别家人200ul酶液 ④在0号管加400ulTCA,1,2号管分别加200ul底物，从加入时开始计时，放入37℃水浴箱中10min ⑤在0号管中加200ul底物，在1,2号管分别加400ulTCA，静置5分钟 ⑥将3只离心管离心5分钟，在OD420nm可见光处测吸光值分别为 离心管 0 1 2 吸光值 0.004 0.067 0.077 4.任务安排： 刘静：准备器材，协助实验 龚加慧：准备器材，协助实验 王瑜红：领取药品，操作实验 孙玲玲：记录数据，协助实验 5：所需材料和试剂： （1）新鲜蒜瓣。 （2）0.05mol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）。 （3）氯仿-乙醇混合液：氯仿：无水乙醇=3:5 （4）丙酮：用前需预冷至4~10℃。 三.项目实施报告 结果 ①由吸光值可知没酶活 ② 大蒜质量/g SOD质量/g 产品得率 30 1.2863 4.29% 结果分析 由于酶具有专一性，或SOD含量太少，致测不到酶活。