乳酸菌的分离与纯化.docVIP

乳酸菌的分离与纯化 概述? 1乳酸菌的种类、形态、生理生化特征 乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。大多数不运动，少数以周毛运动。菌体常排列成链。在其发酵产物中只有乳酸的称为同型乳酸发酵，而产物中除乳酸外还有较多乙酸、乙醇、CO２等物质的称为异型乳酸发酵。有微好氧菌和专性厌氧菌。根据细胞为球状或杆状，可分为两大类，即乳酸链球菌族（Streptococceae）和乳酸杆菌（Lactobacilleae）。??? 乳酸链球菌族，菌体球状，通常成对或成链，在固体培养基上菌落较小，生长缓慢。多数为同型发酵，如链球菌属（Streptococcus），是与人类关系密切的重要菌群，有些菌是人和温血动物的致病菌；有些是人体的正常菌群存在于口腔和肠道；有些是乳制品及植物发酵食品中的常用菌，常在食品工业中使用，如乳链球菌（S．lactis）。少数为异型发酵，如肠膜状明串珠菌（Leuconostocmesenteroides）是制药工业上生产右旋糖酐（即代血浆）的重要菌种，但也是制糖工业的一种害菌，常使糖汁发粘稠而无法加工。乳酸杆菌族，菌体杆状，单个或成链，有时成丝状、产生假分枝。2.实验材料 2.1试验设备 天平、?牛角匙、? 电炉、? pH试纸、?? 量筒、? 漏斗、漏斗架、? 玻璃棒、?棉塞、? 培养基、? 吸管、? 牛皮纸、? 线绳? 、标签、? 500mL锥形瓶个、? 250mL锥形瓶个、? 试管20只、? 500mL烧杯个、? 250mL烧杯个、? 100mL烧杯个、? 酒精灯、? 石棉网、? 接种针（环）。2.2实验仪器 50L的高压蒸汽灭菌锅、? 恒压干热灭菌箱? 、? 超镜台、?? 光学显微镜、? 75%酒精棉、? 冰箱。2.3实验药品 新鲜酸奶、? 脱脂奶粉或全脂奶粉、?? 蔗糖、?? 5ml1.6%溴甲酚绿乙醇溶液1.6g固体溴甲酚绿和98.4g乙醇 、?? 酵母膏、? 琼脂、? 结晶紫染液、?? 卢戈氏碘液、? 95%乙醇、?? 酸复红染液。草酸铵结晶紫染液的配制： 　　 溶液A 溶液B 结晶紫?????? 2克 95%酒精??? 20毫升 草酸铵??? 0.8克 蒸馏水??? 80毫升 　1.将A、B溶液混合，用滤纸过滤后即可使用。 2.结晶紫滴一滴即可，不需多用，以避免污染桌面及手指。3.试验方法及操作过程 3.1BCG牛乳培养基配方及灭菌 （A）液：脱脂奶粉10克，水50ml，加入1.6%溴甲酚绿乙醇溶液1ml，80℃灭菌20min。 （B）液：酵母膏1克，水50克，琼脂2克，pH6.8，121℃灭菌2.min。 按照配方正确称取所需药品放于烧杯中，在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解，用1N NaOH或1N HCl调pH，用pH试纸对照，加琼脂溶化，加热过程要不断搅拌，可适当补水。琼脂完全溶解后倒入250mL的锥形瓶中，用纱布包扎好（注意不要污染纱布）再用牛皮纸包扎，贴上标签（必须用铅笔写），注明何种培养基。在高压锅中，在1kg/cm2压力下维持30min。3.2倒BCG培养基平板的方法 ??将灭好菌的A液和B液趁热充分混合，点燃酒精灯对周围的空气进行灭菌，并在酒精灯的附近用左手握着平板用拇指和小拇指打开一个小缝，趁热将培养液倒如平板内，倒入的量能使培养基刚要覆盖平板底部，倒好后把平板平放到实验台，轻轻晃动是培养基形成一个平面，等培养基冷却凝固后倒放并贴上标签。（注意：整个实验要在酒精灯附近做，以保证培养基不染菌）3.3脱脂乳试管的配制与灭菌 直接选用脱脂乳液或按脱脂奶粉10克与蔗糖5克，水95克（蔗糖与水的比例在1：10的范围内）的比例配制，装量以试管的1/3为宜，115℃灭菌15min。 3.4乳酸菌的分离纯化取市场销售的新鲜的酸奶，分别用接种针接入BCG牛培养基琼脂平板上，40℃培养48h，如出现圆形稍扁平的黄色菌落及其周围培养基变为黄色者初步定为乳酸菌。 选取乳酸菌典型菌落转致脱脂乳试管中，40℃培养8~24h若牛乳出现凝固，无气泡，显酸性，涂片镜检细胞杆状或链球状4.实验结果及讨论