现代生物科技专题——学生.docVIP

现代生物科技专题 6-1　基因工程 1.基因工程的诞生Ⅰ。2.基因工程的原理及技术Ⅱ。3.基因工程的应用Ⅱ。 基因工程的诞生 （1）理论基础： 、DNA双螺旋结构和中心法则的确立、 。 （2）技术基础：基因转移载体的发现、 、DNA合成和测序技术的发明、DNA体外重组的实现、 、第一例转基因动物的问世、PCR技术的发明。 2.基因工程的原理及技术 （1）基本工具 限制酶 DNA连接酶 载体作用 切割和载体 拼接DNA片段， 携带进入受体细胞作用部位 两个核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的 作用 特点 (条件) 识别； 在特定位点上切割 E·coliDNA连接酶；能连接黏性末端和平末端 能在宿主细胞内稳定存在并大量复制； 有多个限制酶切割位点； 具有特殊的 （2）基本操作程序 NO.1目的基因的获取 的构建(目的基因＋＋＋) 深度思考将目的基因导入受体细胞导入植物：法、基因枪法、花粉管通道法导入动物：法导入微生物：法用Ca2＋处理目的基因的检测与鉴定插入检测：转录检测：杂交翻译检测：杂交个体水平检测——实验深度思考—P25） 【技能点拨】 1．区分DNA连接酶和DNA聚合酶、限制性核酸内切酶和解旋酶 (1)DNA连接酶连接两个DNA片段，而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上。 (2)限制性核酸内切酶是切割某种特定的脱氧核苷酸序列，并使两条链在特定的位置断开，而解旋酶是将DNA的两条链间的氢键打开形成两条单链。 2．启动子和终止子 启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，启动转录；终止子是终止转录的位点。插入的目的基因只是结构基因部分，其表达需要调控序列，因而用作载体的质粒的插入部位前需要有启动子，后需要有终止子。 3．区分一个至多个限制酶切点与每种酶一个切点 (1)一个至多个限制酶切点：作为载体必须具有一个至多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 (2)每种酶一个切点：每种酶的切点最好只有一个。因为某种限制酶只能识别单一切点，若载体上有一个以上的酶切点，则切割重组后可能会丢失某些片段，若丢失的片段含复制起点区，则进入受体细胞后便不能自主复制。一个载体若只有某种限制酶的一个切点，则酶切后既能把环打开接纳外源DNA片段，又不会丢失自己的片段。 4．根据受体种类确定基因工程的受体细胞 受体种类不同，所用的受体细胞种类也不相同。 (1)植物：由于植物细胞具有全能性，植物体细胞经过植物组织培养能够形成植物体，所以植物的受体细胞一般是体细胞。 (2)动物：由于动物细胞没有全能性，不能由一个体细胞培养成一个个体，所以动物基因工程的受体细胞不是体细胞，而是受精卵。 (3)微生物：多用原核生物细胞，因为原核生物繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少。 1．某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题。 (1)将抗盐基因导入烟草细胞内，使烟草植株产生抗盐性状，这种新性状(变异性状)的来源属于________________。 (2)如果将抗盐基因直接导入烟草细胞，一般情况下，烟草不会具有抗盐特性，原因是抗盐基因在烟草细胞中不能____，也不能__________________________。 (3)在构建重组质粒时，应选用________和________两种酶对_________和________进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。 (4)基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，下图表示运用影印培养法(使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法)检测基因表达载体是否导入了农杆菌。 培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有____________、________。从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是________________菌落中的细菌。为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的________________作探针进行分子杂交检测，又要用__________________________方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性。 (5)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用________________技术，愈伤组织经___________进而形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加____________________。 2．浙江大学农学院喻景权教授课题组研究发现，一种植物激素——油菜素内酯能促进农药在植物体内的降解和代谢。用油菜素内酯处理后，许多参与农药