食管癌DNA倍体类型与预后关系.pdf

中文摘要 食管癌DNA倍体类型与预后的关系 摘 要 目的：食管癌是威胁人类生命健康的一种恶性肿瘤， 约半数患者确诊时已失去根治性切除机会，超过95％的患 者就诊时已属临床中、晚期，虽经手术切除其疗效仍不满 意。手术治疗后复发转移是影响其疗效的主要原因。预见 食管癌的复发转移危险性，从而加强对高危患者的辅助治 疗和随访，以便早期发现复发加强进一步的治疗，这样就 有希望提高患者的治愈率及生存率。因此，预见食管癌患 者术后复发及转移的危险性也就成为医生临床中一项重要 的工作．虽然目前也有一些指标在临床工作中供医生参考， 但都存在一定的误差。众所周知DNA是细胞增殖复制的物 质基础，肿瘤细胞在其获得无限繁殖能力的同时必然存在 DNA含量的增加，这方面已有大量的研究加以证实。本文 后标本的石蜡包埋组织块进行了回顾性DNA定量分析，以 探讨其与临床各病理特征的关系及在估计食管癌预后方面 的意义。 方法：l病例的选择：选1990～1996年问保定市第三 医院胸外科行食管癌根治病人的存档石蜡包埋组织块共 74例，人选病例均符合下述条件： (1)随访年限最短者不少于五年，如少于五年为已知确实 亡，并且死于食管癌复发或转移。 (2)均为原发性食管癌并首次行外科治疗者。 中文糖要 (3)手术时均没番远处脏器转移。及周围脏器受侵(无T4)． (4)均行食管癌根治术(清扫相应淋巴结)，并有确切的病理 诊断。 (5)均没有接受术前辘助性放疗和化疗。 (6)取每侧病人肿瘸上端或下端的芷常食管石蜡包埋组织 作为I)NA检测的内部参考标准。 2单细胞悬液的制备： 食管癌痰人术藤标本，脖物及其上端戏下端正常食管 粘膜的石蜡包埋组织块共148倒，每例窃取59m切片一张， 作胍染色，由同一病理医师复查病理诊断及分级，同时每 例切取40Pro切片4—5张置于10ml玻璃离心管内，经如下 步骤处理： 2．1萎莞蜡：每管加入2ml二甲苯室温下脱蜡2争q8小时 (检查石蜡是否脱净方法：将二甲苯弃去，加i00％乙醇， 如果有絮状物浮起，视为石蜡来赋净，舞继续脱蜡)。 2。2梯度乙醇水化：弃去二甲苯后依次经5m1100％、95 ％、70％、50％乙醇永化，室温下每步lO分钟，蒸馏永洗 涤两次。 2．3 胃蛋白酶消化；以生理盐水配制0．5％鳇胃蛋鑫酶 (PepSin)，用盐酸调蹦势1．5(一周内新鲜配制)，每管内 加入鬻蛋白酶消化液7ml，放入370C水浴箱内振荡消化30 分钟，然后经300目尼龙网过滤，滤液经1500转／min离 心沉淀5分钟，赛去上清波，PBS液漂洗一次，再800转 ／min离心5分钟，生理盐求漂洗，加入70％乙醇10ml 阐定，置40C冰箱中待检。 3细胞悬液DNA染色 上机前将正常食管粘膜组织的单细胞悬液加入至食管 癌组织的单细胞悬液中同步进行DNA染色：每管加入0．Iml ％RNA酶2ml，370C水浴振荡10分钟，离心，然后加入5瞻 ／mi碘化丙啶Iml，静置染色30分钟上机检测，染色在0 —4℃下进行。 4 DNA含量测定方法 使用荧光激活细胞分选仪(FACS420型)以波长488nm， 功率为300mw氢离子激光作激发光源，细胞发出的荧光信 号以组方图或点阵图及数字表的形式在多道脉冲分析仪上 显示。所得数据经计算机处理，调整仪器的cV值，使稳定 在3％一5％之间。 5结果的判定标准 lander标准，即二倍 肿瘤细胞倍体性的确定按Frieel 体肿瘤只有单一的G。峰，如果直方图中还有额外的G。峰， 那么可确定为异倍体。以DNA指数(DNAIndex，DI)表示DNA 含量，DI等于肿瘤细胞G0／G。峰的均道值除以正常细胞的 DNA含量的Go／G，峰均道值。 将细胞周期分为Go／G。、S、G挪期，细胞周期时相分 布的计算采用价款加宽矩形拟合模型，并计算PI值：PI： S+G。M／Go／G1+s+G。M，所得数据经x2检验或t检验进行统计 学分析。 结果：异倍体肿瘤占63．51％，二倍体肿瘤占36．49％。 二倍体肿瘤的DNA含量明显低于异倍体肿瘤；二倍体肿瘤 的Go／G-期细胞数明显高于异倍体肿瘤，而S、G2M期细胞