中南 博士研究生分子生物题目总结.docVIP

1.什么是RNAi干扰？简述RNAi技术原理和应用前景 与靶基因同源的双链RNA诱导的特异转录后基因沉默现象。其作用机制是双链RNA被特异的核酸酶降解，产生干扰小RNA(siRNA)，这些siRNA与同源的靶RNA互补结合，特异性酶降解靶RNA，从而抑制、下调基因表达。已经发展成为基因治疗、基因结构功能研究的快速而有效的方法。RNAi在探索基因功能基因治疗领域中的应用 RNAi在整形外科领域的应用前景病毒性疾病的治疗遗传性疾病的治疗肿瘤病的治疗在植物学中的应用　基因定点诱变 （Site-directed mutagenesis），是在体外特异性地取代、插入或缺失DNA序列中任何一个特定碱基的技术,包括盒式取代诱变、寡核苷酸引物诱变及PCR定点诱变等. 2. 寡核苷酸引物诱变 使用化学合成的含有突变碱基的寡核苷酸片段作引物,启动单链DNA分子进行复制，随后这段寡核苷酸引物便成为了新合成DNA子链的一个组成部分。 3ＰＣＲ诱变 重组PCR定点诱变: 大引物诱变:核心是第一轮PCR产物为第二轮PCR引物 现在，几乎每个生物实验室都会用定点突变法来研究基因或蛋白质的功能。定点突变法的应用不仅广泛用于基因工程技术领域，还可用于农业培育抗虫、抗病的良种，用于医学矫正遗传病、治疗癌症等病。提高蛋白质的稳定性 白质工程对抗体进行改造选择性剪接（也叫可变剪接）是指从一个mRNA前体中通过不同的剪接方式（选择不同的剪接位点组合）产生不同的mRNA剪接异构体的过程，而最终的蛋白产物会表现出不同或者是相互拮抗的功能和结构特性，或者，在相同的细胞中由于表达水平的不同而导致不同的表型。在人体内大约有60%的转录机制都是变为剪切，剪切变位剪切可以决定基因产生哪种蛋白质因此可以控制基因的表达。当外界环境剧烈变化的时候，机体可以通过变位剪切使基因产生特殊的蛋白质来抵抗外界变化DNA聚合酶Ⅰ的大片段 Klenow片段E.coli DNA聚合酶经胰蛋白酶或枯草杆菌蛋白酶部分水解生成的C末端605个氨基酸残基片段。该片段保留了DNA聚合酶I的5-3ˊ聚合酶和3-5ˊ外切酶活性，但缺少完整酶的5-3ˊ外切酶活性。它可用于填补DNA单链末端成为双链。1.Klenow大片段是一条多肽链，MW76KD，保留了E.coli pol Ⅰ 的5′→3′DNA聚合酶，3′→5′外切酶活性。 2. Klenow在基因工程用于： (1)补平用限制酶消化dsDNA得到的5’粘性末端（即3’延伸末端） (2)同（1），填平过程中，用32p dNTP标记DNA片段3’末端。 (3)cDNA克隆了中，用于合成cDNA的第二条链。 (4)在Sanger双脱氧法 ddNTP系统进行序列分析 6.α-互补载体都带有一个E.coli DNA的短区段，其中含有β-半乳糖苷酶的-α肽基因（lacZ’）的调控序列和头146个氨基酸的编码信息。这个编码区中插入了一个MCS，它并不破坏读框，但是可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞，虽然宿主和质粒编码的片段各自都没有酶活性，但它们可融为一体，形成具有酶活性的蛋白，从而实现互补 α-互补是指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的 β-半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现互补。α-互补是基于在两个不同的缺陷 β-半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。大肠杆菌的乳糖 lac 操纵子中的 lacZ 基因编码 β-半乳糖苷酶，如果 lacZ 基因发生突变，则不能合成有活性的 β-半乳糖苷酶。例如， lacZM15 基因是缺失了编码 β-半乳糖苷酶中第 11-41 个氨基酸的 lacZ 基因，无酶学活性。对于只编码 N-端 140 个氨基酸的 lacZ 基因 （称为 lacZ） ，其产物也没有酶学活性。但这两个无酶学活性的产物混合在一起时，可恢复 β-半乳糖苷酶的活性，实现基因内互补。功能基因组学是利用结构基因组所提供的信息，发展和应用新的实验手段，通过在基因组水平上全面分析基因的功能，使得生物学研究从对单一基因转向多个基因或蛋白质的研究同时进行系统研究的科学“基因改变一功能改变”的鉴定 4) 蛋白质水平，修饰状态和相互作用的探测 3. 基因表达的调控 4. 信号传导 9.DNA指纹图谱及其应用 DNA指纹（基因指纹） 概念——在人体基因组DNA中存在高度可变的小卫星区域，在同一酶解物的Sou-thern印迹图上同一个体的不同组织来源的DNA的谱带完全一致，而不同个体之间（除非同卵双生）谱带都不相同，如同人的指纹具有高度个体特异性一样，这种southern印迹图被称为DNA指纹 由于DNA 指纹图谱具有多位点性、高