实验三蛋白免疫印迹技术（western.docVIP

实验三 蛋白免疫印迹技术（western-blot） 【教学背景】 蛋白免疫印迹技术是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法，蛋白质印迹的发明者是美国斯坦福大学的George Stark。该实验过程需要配置多种试剂，要求严格的pH值及贵重的实验仪器，实验周期长，因此本实验采用虚拟仿真实验系统进行操作。 【实验原理】 Western-blot的基本原理是通过特异性抗体与凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行杂交，然后显色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。 【教学目标】 1.教师讲解实验目的、内容并示范操作过程。 2.观看western-blot实验过程：收集蛋白样品、定量，SDS凝胶电泳，转膜，封闭，一抗孵育，二抗孵育，蛋白检测等，初步了解实验流程。 3.虚拟操作：点击进入，可见western-blot实验需要的实验仪器、正确的实验流程及方法、实验中需要注意的事项等，可反复模拟操作，直至熟练掌握。 （1）组织或细胞的总蛋白提取：在此选项中提供了相应的仪器设备，可选择提取培养细胞的总蛋白或者提取小鼠肝脏组织的总蛋白。进行蛋白浓度测定。 （2）SDS分离蛋白：在此选项下具有PAGE胶的配制、加样方法、电泳电压大小及时间的调节，电泳结束后断掉电源等。 （3）电转移：可进行湿转或半干电转移。选项下提供了相应的仪器，可按照需要选择。 （4）免疫印迹：一抗及二抗孵育。 （5）化学发光检测：拍照并记录结果。 4.实验自测：题库集成了生物学各学科的综合习题，按照章节排列，点击western-blot章节即可浏览相关试题，可以进行自我测试，提交答案后给出本次作答的正误判断、得分及正确率，从而巩固所学知识。 5.进行课堂总结：教师对本次实验进行总结，指出同学们操作容易出现错误的地方并纠正，引导同学们查阅蛋白免疫印迹技术相关知识。 【考试管理】 系统对学生作答进行自动评阅，给出其成绩，教师可以对系统评阅进行纠误，在说明理由后可以重新给分，系统给出学生的最终成绩，教师将成绩导出。