实验十六酱油中山梨酸、苯甲酸的测定.docVIP

实验十七、酱油中山梨酸、苯甲酸的测定 1、目的与要求 掌握酱油、水果汁、果酱中山梨酸、苯甲酸的测定原理及方法。 2、原理 样品中的苯甲酸在酸性条件下蒸馏，馏出液剧烈氧化除去杂质，再次蒸馏后，所得苯甲酸在220nm处有最大吸收，它的吸光度与浓度的关系符合比尔定律，因此可以据此定量测定。同时山梨酸在酸性条件下也能随水蒸汽一起蒸馏出来，可在酸性溶液中，用蒸汽蒸馏的方法将样品中的山梨酸蒸馏出来，并除去非挥发性的干扰物质。山梨酸在弱氧化条件下氧化成丙二醛，再与硫代巴比妥酸反应，生成红色的化合物。其颜色的深浅与山梨酸含量成正比，可以比色测定之。 3、仪器与试剂 3.1 仪器 3.1.1 蒸馏设备。 3.1.2 紫外可见分光光度计。 3.2 试剂 3.2.1 无水硫酸钠。 3.2.2 85%正磷酸。 3.2.3 0.034mol/L重铬酸钾溶液：溶解4.9g重铬酸钾于水中，稀释到500mL。 3.2.4 2mol/L硫酸溶液：稀释66.5mL浓硫酸至500mL。 3.2.5 氢氧化钠溶液：1mol/L、0.1mol/L、0.01mol/L。 3.2.6 0.5%重铬酸钾溶液。 3.2.7 0.5%硫代巴比妥酸溶液：称取硫代巴比妥酸0.5g，加入20mL水，再加1mol/L氢氧化钠溶液10mL，用玻璃棒搅拌使之溶解，然后加入1mol/L盐酸11mL，用水稀释至100mL，摇匀。 3.2.8 0.15mol/L硫酸：取浓硫酸1mL加入到100mL水中，并用用水稀释至120mL。 3.2.9 山梨酸标准溶液：精密称取在105℃干燥至恒量的山梨酸0.0500g用0.1mol/L氢氧化钠溶液溶解后，移入500mL容量瓶中，加0.1mol/L 氢氧化钠溶液至刻度，摇匀，每毫升含山梨酸100μg。临用时取1mL置于50mL容量瓶中，加入0.01mol/L氢氧化钠溶液到刻度，摇匀，每毫升含山梨酸2μg。 3.2.10 苯甲酸标准溶液：准确称量经过干燥的苯钾酸0.1000g，溶于0.1mol/L氢氧化钠溶液中，以水定容至1000mL，每毫升溶液相当于苯甲酸0.1mg。吸取此液10mL于50mL容量瓶中，用0.01mol/L氢氧化钠溶液定容至刻度，每毫升溶液相当于20μg苯甲酸。 4、操作方法 4.1 苯甲酸的测定 4.1.1 提取 准确称取样品10g，置于250mL蒸馏瓶中，加20g无水硫酸钠，磷酸1mL及70mL水，连接蒸馏装置(以50mL容量瓶内置5mL0.1mol/L氢氧化钠溶液为吸收液)。以大火加热，调节火力使馏液为10mL所需的时间为10min。收集馏液45mL后停止蒸馏，以水洗净冷凝器，然后用水定容此接收瓶。 4.1.2 纯化 取蒸馏液25mL置于250mL圆底烧瓶中，加25mL0.0334mol/L重铬酸钾溶液，65mL2mol/L硫酸，回流10min，冷却后加沸石、20g无水硫酸钠，磷酸1mL及40mL水再次蒸馏，以内置5mL0.1mol氢氧化钠溶液的50mL容量瓶为接收瓶，蒸馏液约45mL时停止蒸馏，用少量水洗涤冷凝器，合并洗液并定容至刻度，备用。 4.1.3 空白试验 准确称取样品10g，置于250mL蒸馏瓶中，加20g无水硫酸钠，1mol/L氢氧化钠5mL，65mL水，按上述样品处理方法进行蒸馏，由于溶液为碱性，苯甲酸成为钠盐不能被蒸出。 4.1.4 标准曲线的绘制 取苯甲酸标准溶液50mL，置于250mL蒸馏瓶中，加20g无水硫酸钠、磷酸1mL及20mL水，进行蒸馏。操作按样品提取步骤进行。吸取上述溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL分别置于50mL容量瓶中，用0.01mol/L氢氧化钠溶液稀释至刻度。此时每个50mL溶液中分别含苯甲壳虫酸量为2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mg，以0.01mol/L氢氧化钠溶液作为参比溶液，用紫外分光光度计在225nm波长处测量吸光度，并绘制标准曲线。 4.1.5 样品测定 根据样品中苯甲酸的含量，吸取供测定用的样液及空白试验溶液5mL～20mL，分别置于50mL容量瓶中，用0.01mol/L氢氧化钠溶液稀释至刻度。以0.01mol/L氢氧化钠溶液作为参比液，用紫外分光光度计在225nm波长处测量吸光度。根据测得的吸光度，从标准曲线上查出相应的苯甲酸含量。 4.2 山梨酸的测定 4.2.1 样品处理 根据样品中含山梨酸的浓度称取粉碎均匀的样品5g～10g，置于250mL蒸馏烧瓶中，加入磷酸1mL，无水硫酸钠20g，水70mL和玻璃珠5粒，进行蒸馏，用预先盛有10mL0.1mol/L氢氧化钠溶液的100mL容量瓶接收蒸馏液，当收集到约有85mL蒸馏液时，停止蒸馏，用少量水洗涤冷凝管，最后用水稀释至刻度。准确取出10mL，置于100mL容量