猪人工授精实验室关键技术点.docVIP

猪人工授精实验室实用技术要领 张兴敏1,2，王皓1,2，张川江1,2，丁应兵1,2 （1.重庆市69原种猪场，重庆 409099；2.重庆市天豚种公猪站，重庆 409000） 摘要：全文概述人工授精实验室常用仪器设备配置及用途，重点阐述了实验室操作人员对公猪信息掌握的重要意义，实验室精液检测、稀释、分装，数据分析与存档要领。 关键词：实验室；精液检测；公猪信息；数据分析 随着我国养猪业的持续、健康发展，猪人工授精技术的逐步推广，公猪站和人工授精站如雨后春笋，与之配套的人工授精实验室硬件及人员建设的要求逐日提升。硬件设施配备先进、实用，从业人员综合素质高是对现代人工授精实验室建设的基本要求，尤其是人员的综合素质凸显重要。根据调查，猪人工授精行业经营不规范的现象仍然存在，主要表现为从业人员服务意识淡薄，服务技能欠佳等。致使用户对从业者提供的精液质量，服务水平等方面没有足够的信心。从业人员存在年龄和文化参差不齐的现象，在观念、知识更新和操作上存在差异。所以实验室操作人员必须经过严格、系统化的培训，拥有严格按照操作规程操作的素质，以确保从实验室送出的每一份精液品质的可靠性和安全性。 1 人工授精实验室常用仪器设备和用品 1.1 主要仪器及用品 电子称、显微镜+显微镜恒温板、精子密度仪、比色皿、干燥箱、恒温水浴锅、超纯水机、空调、冰箱、载玻片、盖玻片、微量移液器、移液枪吸嘴、稀释粉、烧杯、采精杯、精液分装瓶、精液保温箱、玻璃棒、温度计、标签纸以及PH试纸等。 1.2 主要仪器设备、用品及用途[1] 1.2.1 电子称 称量精液、稀释液。 1.2.2 显微镜及恒温板 观测精子数、活力和畸形率；恒温板是用于载玻片、盖玻片恒温预热。 1.2.3 精子密度仪、比色皿 测定精子密度。 1.2.4 干燥箱 预热器皿和消毒用品。 1.2.5 恒温水浴锅 等温精液和稀释液。 1.2.6 超纯水机 制作超纯水。 1.2.7 稀释粉、烧杯 配置稀释液。 1.2.8 载玻片、盖玻片 精子活力检测。 1.2.9 微量移液器、移液枪吸嘴 精液的取样或稀释。 2 熟练精液的检测、稀释、分装、保存的操作步骤 2.1 精液检测前的准备 2.1.1 稀释液配制 取1L的超纯水或蒸馏水加入1包稀释粉（不同厂商提供的配比有差异，严格按照说明书操作），充分搅拌并静置半小时待用；使用前需放置于37℃恒温水浴箱；按当日用量配制，不得保存至隔日再用；不得随意更改稀释液配方及配制比例，不同种稀释液不得混合使用。 2.1.2 稀释前的准备 精液未回来前先将盛放烧杯的烘干箱和盛放分装瓶的恒温箱加热到37℃，并且在比色皿中加入240ul的稀释液以备检测密度。 2.2 精液品质检查[2]、[3] 精液从采精室拿来后先查看精液颜色，正常精液为乳白色或浅灰色、略带腥味，偏碱性；精子密度越高，色泽越浓，其透明度就越低。若带有绿色或黄色则有可能是混有尿液，若带有淡红色或红褐色则是混有血液，这样的精液应该舍弃不用。然后从37℃恒温箱中取出盛放精液的烧杯，放入电子天平秤上归零。将刚采回的精液轻轻放入烧杯中，注意尽量避免保鲜袋碰到烧杯内壁，用电子天平称量精液量，按1ml/g计量；接着用显微镜检查精子活率，检查活力时要求载玻片和盖玻片都应在37℃预热，合格精液要求活率不低于0.8（指呈直线运动的精子数所占的比例），；同时用移液枪量取100ul的原精量加入准备好的比色皿中，轻轻摇匀然后用密度仪测量密度，并将数据记录在专用采精记录表上。 2.3 精液的稀释 稀释液配置时搅拌不均匀或被污染，稀释时与精液温度不相同，稀释方法不正确，稀释倍数计算不精确，都会造成精子死亡，活力下降[4]。精液采集后应尽快稀释，原精储存不超过30分钟；稀释液与精液要求等温稀释，两者温差不超过1℃[5]；稀释时以精液温度为标准调节稀释液温度，不得反向操作；稀释前先计算需要加入的稀释液量。依据猪人工授精操作规NY/T636-20022-采精量。稀释时将稀释液沿盛精液的杯壁缓慢加入到精液中，并缓慢搅拌充分混合；高倍稀释时，先行低倍稀释(1:1)，稍后再作进一步稀释；要求稀释后每80ml含有40亿个精子。 2.4 精液分装 精液稀释后，检查活率，若无明显下降，按每瓶80ml分装。为区别不同的精液，可使用不同颜色的输精瓶或输精瓶盖或输精袋。精液装不满输精瓶应排出多余空气，只留少许空气以备贮存过程中混匀精液，且要将口封严。在输精瓶贴上标签，或直接标记公猪耳号和采精日期、时间[6]，使用前要有半月的试情训练，检查两次精液，精液活力在0.8以上，密度中以上，才能投入使用7-8个月的种公猪即可进行调教和人工采精[6]。每次调教时间不得超过15分钟，一旦采精成功，分别在第2，3天再巩固采集一次。应用于人工采精的公猪一般不要再用于自然交配，以免影响采精时的