生防菌JK-2胞外多糖提取条件优化及其对病原菌的抑制作用研.docVIP

生防菌JK-2胞外多糖提取条件优化及其对病原菌的抑制作用研究 张秋芳，刘 波*，史 怀，肖荣凤，官雪芳，葛慈斌，郝晓娟，王秋红 （福建省农科院生物技术研究所，福建 福州 350003） 摘 要 细菌胞外多糖（Exotracelluar polysaccharide，EPS），是指细菌在生长、代谢过程中分泌到细胞外的粘液或夹膜多糖，其成分和结构复杂，常具有调节和增强免疫功能、具抗肿瘤、抗感染、抗炎等多种功效。本课题组筛选到的拮抗菌株JK-2具有抑菌效果,且已有研究表明，其发酵液番茄枯萎病菌抑制作用活性指标2：1、提取次数为4 次、每次振摇时间为10min，粗提液与提取剂的体积比为1：2； （4）透析纯化：于10cm 透析袋（袋孔直径2.1cm,可透过分子量为6,000Da）中，将去除蛋白质后的提取液透析96h； （5）柱层析分离：分别将透析后的提取液用Sephacryl S-200和Superdex-75的凝胶柱进行分离，皆出现明显的单峰；用紫外分光光度计光谱扫描，在260nm和280nm波长下其值接近为零；根据凝胶柱的标准品曲线，初步可得多糖分子量为7.868×104Da； (6)TLC分析：将提取经酸水解后分析进行TLC分析，多糖水解液中初步可确定含有单糖D（+）木糖。 上述各阶段所得物质对本试验室分离到的病原菌的抑制效果:（1）对于从甜瓜、西瓜、辣椒、蕃茄和香蕉中分离到的镰刀菌，其抑制效果大小为：未去除蛋白质的溶液抑制效果较明显大于透析前粗糖溶液和透析后过层析柱前粗糖溶液,而后两者的效果相当；（2）不同阶段的提取物对强、弱致病力青枯菌的抑制效果不同。 关键词：胞外多糖；生防菌JK-2；提取条件；优化；抑菌活性 作者简介：张秋芳，E-mail: qfzhang@163.com。 *通讯作者：刘波，男，博士，研究员，主要从事生物技术和生物防治研究，E-mail：fzliubo@163.com。