蛋白同源性及其交叉反应特性的研究.pdfVIP

·848· JMicrobiol 史堡筮生物堂塑复瘴堂盘壶丝!Q生2旦筮!Q鲞筮!塑ChinImmunol,September2010,V01．30,No．9 ．疫苗学． 人乳头瘤病毒L2氨基端蛋白的同源性 及其交叉反应特性研究 李玲玲 赵朋云 王佳 周珠哈 朱珊丽 薛向阳 张丽芳 【摘要】 目的研究人乳头瘤病毒(HPV)次要衣壳蛋白(t2)在临床常见HPV感染型别中的 同源性及其交叉反应特性。方法采用生物信息学方法对临床常见HPV感染型别中的L2氨基酸序 列进行比对，发现其氨基端1-200序列具有高度同源性。采用PCR法从官颈癌患者组织DNA中扩 增HPVl6t2(1～200)肽段的碱基序列，将其克隆至原核表达载体PGEX．4T-l得到重组质粒PGEX· 4T一1一HPVl6 coli L2(1—200)。将测序鉴定正确的重组质粒转入EBL21(Dr3)中，经异丙基．B—D一硫 代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，SDS·PAGE和Westernblot鉴定；进一步通过Westernblot检测HPVl6 L2(1—200)融合蛋白与HPV6、11、16和18型DNA检测阳性临床患者血清的特异性结合能力；以镍 螯合亲和层析柱(Ni-NTAAgarose)纯化的HPVl6L2(1—200)融合蛋白作为包被抗原，采用间接 ELISA法对98例尖锐湿疣患者、135例宫颈癌患者及96例健康对照者血清进行特异性血清IgG抗体 检测。结果在HPV6、11、18、35等14个临床常见型别中，与HPVl612的1—200间的氨基酸序列 比较，同源性达到52．7％一74．3％；成功构建了含有HPVl6L2(1～200)的重组质粒PGEX．4T-1- HPVl6 L2(1—200)，含有HPVl612(1～200)的融合蛋白在原核表达体系中呈高效表达，表达量占总 DNA 蛋白的22．6％；表达产物的相对分子质量(M。)约49×103，与预期jlf，相符；以HPV6、ll、16和18 阳性患者血清为一抗进行Westernblot分析，结果显示，在M，约49×103处出现特异性条带。El。ISA 结果显示，尖锐湿疣组、宫颈癌组患者血清及健康对照者血清抗体均值分别为0．753±O．262、0．756± 0．274和0．178±O．157，阳性率分别为89．8％、88．9％和9．4％。三组间血清抗体均值及阳性率比较 差异均具有统计学意义(P均0．001)，而尖锐湿疣组和宫颈癌组间的血清抗体均值比较差异无统计 L2 学意义(P0．05)。结论HPVN端l一200氨基酸序列具有高度同源性，并在HPV6、1l、16和18 型别间具有交叉反应。 【关键词】 人乳头瘤病毒；次要衣壳蛋白；同源性；交叉反应 Researchon andClOgSreactioncharacteristicsofhuman 1,2N．terminal homology papillomavirus J洫，ZHOU protein／2Ling—ling，ZHAOPeng—yun，WANGZhu—h．ZHUShan-li，XUEXiang-yang． MolecularVirus ZHANG and U-fang．DepartmentofMicrobiologyImmunology／Instituteof Immunity． WenzhouMedical College．Wenzhou325DDD．China author：ZHANG Corresponding U-fang，Email：zhanglifan908@12