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第六章 分子荧光光谱 Molecular fluorescent spectrometry 华东理工大学分析测试中心 分子荧光光谱  当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线）照射， 吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发出比入射光的波 长长的出射光（通常波长在可见光波段）；而且一旦停止入射 光，发光现象也随之立即消失。  分子荧光是一种光致发光过程(photoluminescence):荧光 (fluorescence)和磷光(phosphorescence)  分子荧光光谱是一种发射光谱分析方法，是基于对化合物的荧 光测量的分析方法。 分子荧光光谱 6.1 分子荧光的形成 6.2 荧光的激发光谱与发射光谱 6.3分子荧光光谱法的特点 6.4 分子荧光的产生条件 6.5荧光强度与浓度的关系 6.6影响荧光强度的因素 6.7分子荧光光谱仪 6.8分子荧光光谱法的应用 6.1 分子荧光的产生 6.1.1 分子的激发 基态→激发态(S 、S 、 1 2 激发态振动能级) ：吸收 激发态 特定频率的辐射，跃迁一 次到位。 基态 单重态：一个分子中所有电子自旋都 S0 S1 T1 配对的电子状态。 三重态：有两个电子的自旋不配对而 平行的状态。激发三重态能量较激发单 重态低。 6.1.2 分子的失活 激发态→基态：多种途径和方式，速度最快、 激发态寿命最短的占优势。 激发态分子不稳定，要以辐射或非辐射跃迁方 式回到基态，这就是激发态分子的失活。  辐射形式：荧光和磷光  无辐射形式：振动弛豫，内转换，系间跨越，外 转换 6.1.3 跃迁的方式1-无辐射跃迁 ☆振动驰豫 ：由于分子间的碰撞，激发态分子由同一电子 能级中的较高振动能级转至较低振动能级的过程，其效率较 高。激发态分子常常首先发生振动驰豫。该过程只需10- 14~10-12s 。 ☆内部转换：相同多重态的两个电子能级间，电子由高能级 回到低能级的分子内过程，10-13~10-11s 。 ☆系间跨越 ：激发态分子的电子自旋发生倒转而使分子的多 重态发生变化的过程。含有重原子的分子中（如I、Br等）， -6 -2 系间窜跃最常见，10 ~10 s 。 ☆外部转换 ：激发态分子与溶剂或其他溶质相互作用和能量 转换而使荧光（或磷光）减弱甚至消失的过程。荧光强度的 减弱或消失，称为荧光熄灭或猝灭。 6.1.3 跃迁的方式二-辐射跃迁 ☆荧光发射：受光激发的分子经振动驰豫、内转换、振动驰豫到 达第一电子激发单重态的最低振动能级，以辐射的形式失活回到 基态，发出荧光。 由于无辐射使分子吸收的能量有部分损失，因此荧光的能 -9 - 量比吸收的能量小，即荧光波长一般比激发光波长长。 10 ~10 7 s 。 ☆磷光发射 ：若第一激发单重态的分子通过系间窜跃到达第一激 发三重态，再通过振动驰豫转至该激发的最低振动能级，然后以 辐射的形式回到基态，发出的光线称为磷光。 由于激发三重态能量较激发单重态低，所以磷光的波长比荧光 的波长稍长。 磷光仅在很低的温度或黏性介质中才能观测到。因此磷光很少 -4 应用于分析。10