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维普资讯 第 36卷 第 8期 西北农林科技大学学报 (自然科学版) Vo1．36 No．8 2008年 8月 JournalofNorthwestAFUniversity(Nat．Sci．Ed．) Aug． 2008 米胚芽谷氨酸脱羧酶的分离纯化及 部分酶学性质的研究 吕莹果，张 晖，马晓博，姚惠源 (江南大学 食品学院，江苏 无锡 214122) [摘 要] 【目的】分离纯化米胚芽谷氨酸脱羧酶 (Glutamatedecarboxylase，GAD)，并对其酶学性质进行研究。 【方法】通过(NH )2SO 分级沉淀、DEAE-SephroseFF离子交换色谱 、Superdex200凝胶过滤色谱和 GluSephrose CI4B亲和色谱等分离纯化技术 ，对米胚芽 GAD进行分离纯化 。用体积排阻高效液相色谱测定米胚 GAD的相对分 子质量 ，SDS测定其亚基的相对分子质量 。测定米胚 GAD的最适温度和 pH，通过酶动力学试验测定其动力 学常数 (K )和最大反应速度 (…)，并测定 KC1和 MgSO 等化学物质对酶活性的影响。 【结果】分离纯化得到了米 胚 GAD，其纯化倍数为 65．7，比活达 223．4U／mg，酶活 回收率为 1O．8 。米胚 GAD的相对分子质量为 78ku，亚基 相对分子质量为 4oku，说 明米胚 GAD是 由2个相 同亚基构成 的二聚体 。米胚 GAD的最适反应温度为 4o℃，最适 反应 pH为 5．6；米胚 GAD的热稳定较差，8o℃时酶几乎完全失活；米胚 GAD在 pH 4．5～8．0较为稳定 ，能保持 88 以上 的酶活。米胚 GAD对谷氨酸 Glu的 K 为32．3mmol／I，V… 为 1．159mg／min；对磷酸吡哆醛 (PIP)的 K， 为 1．7ffmol／I，V…为 1．171mg／min。K 和 Ag 对米胚 GAD的活力有较大抑制 ，Mg”、Mn 、A1”和 Ii 等对活 性影响不大，500 mol／LCa 对米胚 GAD有较强的激活作用 。 【结论】米胚 GAD的性质与其他植物 GAD存在差 异 。 [关键词] 米胚芽；谷氨酸脱羧酶 ；酶学性质分析 [中图分类号] Q557．9 [文献标识码] A [文章编号] 1671-9387(2008)08一O19O一07 PurificationandcharacterizatiOnofglutamate decarbOxyIasefrOm ricegerm LV Ying—guo，ZHANG Hui，MA Xiao-bo，YAO Hui—yuan (S(hoolofFoodScienceandTechnology，SouthernYangtzeUniversity，Jiangsu，Wuxi214122，China) Abstract：[ObjectivelThestudypurifiedandresearchedthepropertiesofricegerm glutamatedecar— boxylase(GAD)．[MethodlGADwaspurified65．7-foldfrom ricegerm usingacombinationofammonium sulfatefractionation，DEAE—SepharoseFF ion exchangechromatography，Superdex一200 gelfiltrationchro— matography，andGlu—SepharoseCI4B affinitychromatography．SE—HPICwasusedtodeterminetherela— tivemolecularweight(M r)ofG