蛋白质沉淀剂对棉铃虫谷胱甘肽S_转移酶部分纯化.pdfVIP

昆 虫 学 报 Acta Entomologica Sinica , April 2005 , 48 (2) : 172 - 178 ISSN 蛋白质沉淀剂对棉铃虫谷胱甘肽 S- 转移酶的部分纯化 汤　方 , 张常忠 , 梁　沛 , 史雪岩 , 高希武 ( 中国农业大学农学及生物技术学院昆虫学系, 北京　100094) 摘要 : 通过用聚乙烯亚胺 ( PEI) 、硫酸铵、聚乙二醇 ( PEG) 沉淀技术和 GSH- Sepharose 4B 亲和柱对棉铃虫 Helicoverpa armigera ( Hübner) 幼虫中谷胱甘肽 S-转移酶进行了部分纯化研究。结果表明 PEG10000 和 PEG20000 的纯化效果优于硫酸铵 的沉淀效果。通过 PEI 沉淀去核酸后 , 再用硫酸铵沉淀 , 中肠和脂肪体 GST 活性分布在 70 %～75 %和 60 %～65 %沉淀段 , 比活力分别为 108149 和 59641 nmol (min ·mg) , 纯化倍数分别为 253 和 22 。在 6 种 PEG 中 , PEG10000 和 PEG20000 的纯 化效果较好。在中肠和脂肪体中 PEG10000 沉淀的 GST 活性峰分别在40 %～45 %和 30 %～40 % , GST 比活力分别为79511 和 1 08018 nmol (min ·mg) , 纯化倍数分别是24 和 397 。PEG20000 沉淀中肠和脂肪体 GST 的活性峰分别在25 %～40 %和 25 % ～45 % , 比活力分别是76757 和 94596 nmol (min ·mg) , 纯化倍数分别是 281 和 305 。用 GSH- Sepharose 4B 纯化中肠 GST , GST 比活力达到5 88844 nmol (min ·mg) , 纯化倍数达到 10738 。 关键词 : 棉铃虫 ; 谷胱甘肽 S-转移酶 ; 硫酸铵沉淀 ; 聚乙烯亚胺沉淀 ; 聚乙二醇沉淀 ; GSH- Sepharose 4B 亲和柱 中图分类号: Q9659 　　文献标识码 : A 　　文章编号 : (2005) Partial purification of glutathione S-transferases by protein precipitators in the cotton boll worm , Helicoverpa armigera ( Hübner) TANG Fang , ZHANG Chang- Zhong , LIANG Pei , SHI Xue- Yan , GAO Xi-Wu (Department of Entomology , College of Agronomy and Biotechnology , China Agricultural University , Beijing 100094 , China) Abstract : The partial purification of glutathione S-transferases ( GST) in larvae of the cotton bollworm , Helicoverpa armigera ( Hübner ) was studied using ammonium sulfate fractionation after polyethylene imine ( PEI) fractionation , polyethyleneglycol ( P