定稿 14-3-3蛋白zeta亚型多克隆抗体制备.pdfVIP

安徽大学学士论文 谭振 14-3-3 蛋白zeta亚型多克隆抗体的制备 谭振 安徽大学生命科学学院 2002 级生物科学 指导老师 黄蓓教授 安徽 合肥 230039 【摘要】 目的 制备并纯化重组 14-3-3 蛋白zeta亚型多克隆抗体，对其进行鉴定并检测其效价。方法 以诱导大肠杆菌产生的 His-14-3-3zeta 亚型蛋白为抗原，免疫家兔。用 Western Blot方法检测制备的 抗血清效价和特异性。 结果 SDS检测显示所诱导产生的蛋白为 His-14-3-3，用 Western Blot 检测显示纯化后的 14-3-3zeta 亚型蛋白抗体与纯化的 His-14-3-3 蛋白反应效价为 1:50。 结论 已成 功地制备出了 14-3-3zeta 亚型蛋白抗体，为研究 14-3-3 蛋白在机体生理和病理情况下的作用机制奠定 了基础。 【关键词】 14-3-3 蛋白；zeta 亚型；融合蛋白；多克隆抗体；纯化 Preparation of Polyclonal Antibody Against Recombinant 14-3-3 Zeta Isoform Tan Zhen Grade 02, Bioscience，School of Lifescience of Anhui University Tutor: Huang Bei Professor Anhui, Hefei, PRC 230039 【Abstract 】 Objective To prepare, purify and identify the polyclonal antibody against recombinant 14-3-3 zeta isoform.and determine its titer and concentration. Methods The rabbits were immunized with prokaryotic expressed His-14-3-3 fusion protein and the collected antiserum was evaluated by Western blot. Results SDSrevealed that the protein induced was His-14-3-3. Western blot revealed that the reactive titer of the prepared antibody against purified 14-3-3 protein was up to1:50. Conclusions The polyclonal antibody against recombinant 14-3-3 zeta isoform was successfully prepared and it laid a foundation of study on the action mechanism of 14-3-3 protein physiological and pathological states. 【Keywords】 14-3-3 protein; zeta isoform; fusion protein; polyclonal; purification 14-3-3 蛋白是一组高度保守、几乎在所有真核生物细胞都表达的蛋白质家族[1]，根据它 在 DEAE-纤维素层析中的组分分布数量和在淀粉—凝胶电泳中的迁移位置而命名。其单体分子量大约 30，000，等电点（PI）4.0-5.0[2]。14