酵母穿梭质粒构建初稿.docVIP

酵母穿梭质粒的构建的初稿 实验目的 学习构建穿梭质粒的原理 掌握构建人工质粒的方法 二、实验原理 所谓穿梭质粒是指。此概念不仅用于不同的微生物菌群之间，也可以推广到真核生物表达载体的构建，如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳动物表达载体pMT2 和用于植物细胞的Ti质粒。这些穿梭质粒不仅可以在大肠杆菌中复制扩增，也可以在相应的枯草、酵母、动物或植物细胞中扩增和表达。这样利于对质粒的分子生物学操作和大量制备。 （六）大肠杆菌感受态细胞转化 取200μL 新鲜配制的感受态细胞，加入DNA 2μL (50ng)混匀，冰上放置30min。 同时做两个对照管。 －受体菌对照：200μL感受态细胞+2μL无菌水。 －质粒对照：200μL 0.1mol／LCaCl2 溶液+2μL质粒DNA溶液。 1、将管放到42°C循环水浴1~2分钟。 2、冰浴2min。 3、每管加800μLB液体培养基，37℃培养1h. (七) 1、将适当体积（100μL）已转化的感受态细胞，为转化的感受态细胞对照和质粒对照分别涂在含有氨苄青霉素（100μg/ml）的LB培养皿中。再将感受态细胞分别涂布于LB培养基上， 2、倒置平皿37℃培养12~16小时，出现菌落。 3、挑取质粒对照组和重组子的单菌落进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，进行对照。 五、结果分析 ARS403 Length: 247 Wed Jun 22