外源基因表达系统与研究进展.pdfVIP

第6卷第5期2006年3月 科学技术与工程 V01．6No．5March2006 Science and ⑥2006 167l一1815(2006)5—0582—07 TechnologyEn西neering 生物科学 外源基因表达系统的研究进展 郭广君 吕素芳王荣富+ (安徽农业大学生命科学学院，合肥230036) 摘要最近20多年来，随着重组DNA技术的迅速发展，对于克隆基因表达问题的研究也日渐深入，并积累了 相当丰富的知识。外源基因的表达系统包括原核表达系统和真核表达系统，它们各有优缺点，在选择时应 衡量使用。 关键词原核表达系统 真核表达系统 大肠杆菌表达系统 酵母表达系统 昆虫细胞表达系统 哺乳动物细 胞表达系统 中图法分类号Q344．13；文献标识码B 原核表达系统和真核表达系统各有优缺点。 菌(一般是大肠杆菌)，通过诱导表达、纯化获得所 前者是最早被采用，也是目前研究最清楚的表达系 需的目的蛋白¨’2o。其优点是能够在较短时间内获 统，其中大肠杆菌表达系统是外源基因表达的首 得基因表达产物，且所需的成本相对较低。大肠杆 选。真核表达系统具有翻译后的加工修饰体系，表 菌的遗传背景清楚，又由于其具有周期短、高效率、 达的外源蛋白更接近于天然蛋白质。因此，利用真 易操作、使用安全等特点，成为外源基因的首选表 核表达系统来表达目的蛋白越来越受到重视。 达系统。 1．1大肠杆菌表达载体的类型 1原核表达系统 表达系统的核心是表达载体。目前已知的大 肠杆菌表达载体至少有以下几种口J：非融合型表 在各种表达系统中，最早采用的是原核表达系 达、融合型表达、分泌型表达。若按启动子类型分， 统，这也是目前掌握最为成熟的表达系统。该项技 目前广泛使用的大多数质粒表达载体主要是由入 术主要是将已克隆入目的基因片断的载体转化细 噬菌体的P。启动子、大肠杆菌乳糖操纵子的lac启 2005年11月21日收到安徽省自然科学基金(0104“06，粒的B一内酰胺酶启动子等一批强启动子构成的。 050410107)和安徽省重点科研项目 非融合型表达优点在于：表达的非融合蛋白与 资助 天然状态下存在的蛋白在结构、功能以及免疫原性 第一作者简介：郭广君(1978一)，男，山东东平人，在读硕士研究 等方面基本一致，从而可以进行后续研究。为了提 生，研究方向：光生物物理。E—mail：画lsf@126．com。 高翻译效率，人们在设计表达载体时采用了许多办 +通讯作者简介：王荣富(1954一)，男，安徽合肥人，博士，教授， 博士生导师，研究方向：植物分子生理生态的研究。E—mil：正 法：优化翻译起始区以达到高效表达Hj、构建一套 waIlg@8llau．edu．cno 万方数据 5期 郭广君，等：外源基因表达系统的研究进展 583 用∞J。在构建表达载体时，使用“原核翻译增强子” 白¨5|。包涵体虽然利于分离纯化，但是对表达产物 序列，以提高翻译效率∞o。鉴于野生型大肠杆菌基 的活性不利。涉及包涵体形成的主要理化因素有： 因多以多顺反子形式来组织，故采用双顺反子表达