分子生物学大实验——目基因克隆及表达.docVIP

分子生物学大实验——目的基因的克隆及表达 第一节 基因操作概述 2 一、聚合酶链式反应(PCR) 2 二、质粒概述 4 三、凝胶电泳 5 四、大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 6 五、重组质粒的连接 7 六、限制性内切酶消化 7 七、SDS蛋白质电泳 7 第二节 材料、设备及试剂 7 一、材料 8 二、设备 8 三、试剂： 9 第三节 操作步骤 10 一、目的基因的获得： 10 二、pET-21bT（pET-21bR、pET-21b）载体的获得： 11 三、pET-21b等与目的片段的连接作用 12 四、转化大肠杆菌DH5α进行阳性克隆子筛选与鉴定 13 五、转化转化大肠杆菌BL21plyst，摇菌进行SDS电泳。 14 六、融合蛋白的毒力测定 16 第四节 本实验的实验报告 16 第一节 基因操作概述 一、聚合酶链式反应(PCR) PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法。：(1)(Denature)：DNA片段在94℃下解链；(2)(Anneal)：(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对；(3)(Extension)：Taq DNA聚合酶合成DNA的最适温度下，DNA为模板进行合成。，DNA扩增一倍，DNA又可作为下一轮循环的模板，25～35DNA扩增达106倍。　　（一）、PCR反应中的主要