低温解烃菌T7-2分类鉴定及治理海洋石油污染条件优化.pdfVIP

维普资讯 第 4O卷 第 1期 南 开 大 学 学 报 (自然科学版) Vo1．40 Ngl 2007年 2月 ActaScientiarumNaturaliumUniversitatisNankaiensis Feb．2007 文章编号：0465—7942(2007)01—0099—06 低温解烃菌 T7—2分类鉴定及治理海洋石油污染的 Z条r；：件lT优化n 黄 磊，李 丹，谢玉娟，马 挺，梁凤来，刘如林 (南开大学 生命科学学院，天津 300071) 摘要：从渤海油船泄漏区域的海底泥中筛选到一株能降解柴油的低温解烃菌T7—2，初步鉴定为红平红球菌 (Rhodococcuserythropolis)．该菌在接种到以柴油为碳源的海水中，通过补加少量氮 、磷盐及微量酵母粉 ，l5℃振 荡培养7d，降解率达到6O．14 ．采用响应面法 (RSM)对补加营养进行了优化．方差分析表明二阶多项式模型 是适合的，回归分析得到了相应的参数．T检验证明(NH)。SO 、NazHPO 和酵母粉均是影响柴油降解的显著性 因素．优化的补加营养条件为 (NH)2SO 为 2．53g／L、Na2HPO 为2．75g／L和酵母粉为 1O．19mg／L，验证实验 和预期一致，优化后降解率达到75．09 ，比优化前提高了25 ． 关键词：低温 ；红球菌；条件优化 ；响应面法 中图分类号：X172 文献标识码 ：A O 引 吾 海洋环境 中最广泛存在的污染可以归之为石油污染．随着海上油田开发和运输的不断发展，石油泄 漏造成的污染 日益严重，在国内外 已引起关注．生物技术是彻底治理海洋油烃污染的根本途径．由于细菌 的结构相对简单，更能适应极端环境，所以，大多数有关烃降解微生物的研究是围绕着细菌进行的[1．虽然 目前已经有大量的烃降解菌被报道，但寻求具有特定生理功能，如适应海洋低温、高盐、贫营养等极端环境 以及具有特定降解途径的烃降解菌仍然是非常重要的工作[2叫 ． 海水的主要化学成分有阳离子Na、K 、Ca抖、Mg 和sr抖，阴离子Cl一、SOi一、Br一、HCO~-(COi一)和 F一，还有分子形式的H。BO。，其总和占海水盐分的99．9％．对于微生物生长而言，除了碳源外，缺的是氮、 磷盐及生长因子，所 以对海洋石油污染的生物治理需要补加所缺乏的营养． 采用响应面法(RSM)对海水中补加营养进行了优化，包括 (NH)SO、NaHPO 和酵母粉 3个因素， 获得了各因素的最优水平及交互作用的信息． 1 材料和方法 1．1 菌种 RhodococcuserythropolisT7—2由本室筛选 、鉴定并保藏． 1．2 培养基 种子培养基 (g／L)：Na2HPO 1．5，KH2PO 3．48，(NH )2SO 4，MgSO 0．7，酵母粉 0．01，pH7．2． 接种时加入 5g／L的工业乙醇． 加富海水培养基(g／L)：(NH )SO 4，NaHPO 1．5，酵母粉 0．01，用天然海水配制，天然海水取 自塘 沽海滨浴场 ，pH为 6．5左右，接种时加入 5g／L的0柴油． 1．3 解烃菌株分类鉴定 生理生化特征分析参见文献El1]． 收稿 日期 ：2006-12—11 基金项 目：国家 自然科学基金 作者简介：黄 磊(1980一)，男，天津人，博士研究生． 维普资讯 · 1OO · 南 开 大 学 学 报 (自然科学版) 第 4O卷 16SrDNA序列分析：以菌株基因组DNA为模板，用 16SrDNA通用引物扩增得到近全长的16SrD— NA．PCR产物测序后采用 ClustalX1．8对所获得的核苷酸序列进行 比对分析，得到序列之间的相似值 ，用 M