白菜_EM_NRT2_EM_基因克隆及表达模式分析.pdfVIP

园 艺 学 报 2011 ，38 （12）：2309 –2316 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 白菜NRT2 基因的克隆及表达模式分析 * 孔 敏，杨学东，侯喜林 ，刘同坤，任 君 （南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室，农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室，南 京 210095 ） 摘 要：以白菜（Brassica campestris ssp. chinensis Makino ）品种‘苏州青’为试材，采用RT-PCR 技术，获得 1 个高亲和硝酸盐转运蛋白基因（NRT2 ）的cDNA 序列，全长 1 593 bp，推断其编码 530 个 氨基酸，命名为 BcNRT2 。序列分析表明：BcNRT2 基因与甘蓝型油菜 BnNRT2 基因和拟南芥 AtNRT2.1 基 因核苷酸序列的相似性分别为 98%和 90%，氨基酸序列的相似性分别为 99%和 95%，表明植物中 NRT2 基因保守度较高。实时定量 PCR 表达分析表明，BcNRT2 在白菜根部的表达量最高，为诱导型表达。低 浓度 NO - （0.2 mmol · L-1 KNO ）处理0.5 h 后其表达量迅速上升，BcNRT2 可能为 NO -感受器。高浓度 3 3 3 NO - （20 mmol · L-1 KNO ）处理后其表达量更高，持续时间较长，可能是受到低亲和硝酸盐转运蛋白 3 3 NRT1.1 的调控而产生的高水平响应。原生质体的瞬时表达显示，BcNRT2 蛋白位于细胞膜上。 关键词：白菜；硝酸盐；NRT2 ；实时定量PCR ；亚细胞定位 中图分类号：S 634.3 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2011 ）12-2309-08 Cloning and Expression Pattern Analysis of NRT2 Gene in Non-heading Chinese Cabbage * KONG Min ，YANG Xue-dong ，HOU Xi-lin ，LIU Tong-kun ，and REN Jun （State Key Laboratory of Crop Genetics and Germplasm Enhancement ，Nanjing Agricultural University ，Key Laboratory of Biology and Germplasm Enhancement of Horticultural Crops in East China ，Ministry of Agriculture ，Nanjing 210095 ， China） Abstract ：In this study ，a full-length of cDNA sequence of a high-affinity nitrate transporter gene BcNRT2 was cloned from non-heading Chinese cabbage （Brassica campestris ssp. chinensis Makino ） cultivar ‘Suzhouqing’using reverse transcript PCR （RT-PCR ）. Sequence analysis showed that the length of n