动物结核病检测技术(病理).pptVIP

动物结核病检测 主讲人：耿环 简介 牛结核病(Bovine?tuberculosis)主要是由牛分支杆菌所引起，在多种组织器官形成干酪样坏死、肉芽肿(结核结节)和钙化结节病变为特征。在家畜中，牛最易感染结核病，特别是奶牛，其次是水牛和黄牛[1]。世界动物卫生组织(OIE)将牛结核病列为B类动物疫病[2]。? 　临床症状和病理变化诊断? 牛结核病临床症状不典型，感染前期不出现临床症状，而感染后期常出现体弱、厌食、消瘦、呼吸困难、淋巴结肿大和咳嗽等，这些症状在其他疾病也可看到，故早期临床诊断不易获得准确结果。病理学检查可以根据特征病变确诊，如干酪样坏死、钙化、上皮样细胞、多核巨细胞和吞噬细胞等[4]，但必须在宰杀后进行。? 病料的采集和处理 ?? 用于细菌学检查的材料采自淋巴结及其他组织。当活畜有可疑的呼吸道结核、乳房结核、泌尿生殖道结核、肠结核时，其痰、乳、精液、子宫分泌物、尿和粪便可作为细菌学检查的材料。 痰 对牛常可用痰进行细菌学检验。牛咯痰极少，宜在清晨采集。用硬橡胶管自口腔伸人至气管内，外端连接注射器吸取痰液。亦可取牛咳出的疾块进行检验。痰样品稀薄时，可加人等量的4％～6％硫酸处理，如痰样品粘稠时，则加入5倍量的4％硫酸处理。充分摇匀后置37℃作用20min，以3000r／min～4000 r／min离心，沉淀物作染色镜检、培养和动物试验。 乳 怀疑有乳房结核时，可无菌采集乳汁进行检验（一般以挤出之最后乳汁含菌量较多，早晨挤出的乳中含菌量最高）。将乳汁分置 4～6支离心管中，每管 10 mL，以 3000 r／min～4000r／min离心20 min～30 min，吸取上层乳脂和管底的沉淀物作染色镜检、培养和动物试验。 精液和子宫分泌物 在生殖道结核可疑时，可采集公畜精液、母畜子宫分泌物进行细菌学检查。 处理子宫分泌物，可用15%~20%安替福民溶液，混匀后静置2h~3h,3000r/min~4000r/min离心20min，弃上清，加10ml，蒸馏水于沉淀物中。即可作动物试验，经1.5~2个月剖检。 尿 有肾结核可疑时，可采集尿液，一般采集中段尿液，以早晨第一次尿为宜。如仅作染色镜检，可将尿液3000r/4000r/min离心20min后，取沉淀物涂片。如作培养或动物试验，则应将尿液进行消化浓缩处理，再进行检验以免杂菌生长而影响检验结果。 粪便 有肠结核可疑时，可采集粪便进行细菌学检查，患肺结核的牛只，有时在粪便中亦可检出结核分枝杆菌。因牛常将痰液吞咽至消化道中，随粪便排出。尽量采集混有粘液或脓血的粪便。 组织器官 尽量采集有结节病灶的部位。病变组织需先研磨，制成乳剂，通常取组织乳剂或其他液状病2ml~4ml，加入等量的5%氢氧化钠溶液，充分振摇5min~10min，或摇至发生液化为止，液化后经3000r/min~4000r/min离心15min~30min，沉淀物加1滴酚红作指示剂，以2mol/L盐酸中和至淡红色后，作染色镜检、培养和动物试验。如病料为脓状或干酪状或钙化的结节病灶组织，可直接作染色镜检，往往可以检出众多的结核分枝杆菌。 染色镜检 涂片先在玻片上涂布一层薄甘油蛋白（鸡蛋白20ml，甘油20ml，水杨酸钠0.4g，混匀），然后吸取标本滴加其上，涂布均匀。如检验标本为乳汁等含脂肪较多的材料，在涂片制成后，可先用二甲苯或乙醚滴加覆盖于涂片之上，经摇动1min~2min脱脂后倾去，再滴加95%酒精以除去二甲苯，待酒精挥发后即可染色。 * * 对那些结核分枝杆菌PPD(提纯蛋白衍生物purified? protein? derivative)皮内变态反应试验阳性，但尸检时无病理学病变的动物，可从下颌、咽后、支气管、肺（特别是肺门及肺门淋巴结）、纵隔及一些肠系膜的淋巴结采集样品送检。送检样品应封装在无菌的容器内冷藏运送。  也可用2倍量15％～20％安替福民（antiformin）溶液处理痰液，将混合物置37℃作用lh～2h后离心。以灭菌生理盐水冲洗沉淀物几次后，取沉淀物染色镜检、培养和动物试验。 或将粪便加2倍量灭菌蒸馏水磨碎，然后加氯化钠至饱和。当液体中残渣沉淀后（液体完全澄清），浮起的薄膜含有大量的结核分枝杆菌。取出薄膜，用等量的4%氢氧化钠充分混合，置37℃中3h，然后离心，取沉淀物用8%盐酸中和后，即可作染色镜检、培养和动物试验。 *