核因子κB在子宫内膜异位症中表达和意义.pdfVIP

核因子κB 在子宫内膜异位症中的表达和意义 王宇翮 牛晓宇 钱晓蕾 通讯作者：石钢 四川大学华西第二医院妇产科 摘 要：目的：了解核因子κB在子宫内膜异位症患者外周血及腹腔液淋巴细胞中的表达， 探讨 NF-κB 与子宫内膜异位症发病机制间的关系。方法：选取住院进行腹腔镜手术患者， 分为子宫内膜异位症组（EMS 组）和对照组（分别为 23 例和 18 例），采用免疫组织化学法 检测两组患者的外周血及腹腔液淋巴细胞中 NF-κB 的表达水平，数据经过平方根反正弦变 换后进行 t检验、直线相关分析、χ2检验和方差分析。结果：NF-κB 在外周血淋巴细胞和 腹腔液淋巴细胞中的表达呈正相关关系；其表达不受正常月经周期的影响。其表达的阳性率 在 EMS 组中高于对照组，差异有统计学意义（p0.05），且在卵巢宫内膜囊肿与腹腔结节之 间，轻症与重症之间具有显著性差异 （p0.05）。结论：NF-κB 和 EMS 的发病机制可能有关， 与症状及病情程度之间也可能相关。 关键词：子宫内膜异位症；核因子κB；炎症 前言 子宫内膜异位症是具有增殖活性的子宫内膜异位到子宫腔以外而形成的一 类妇科常见病，近年研究发现,子宫内膜异位症的发病与细胞因子有着密切的关 系[1]。核因子κB（nuclear factorκB，NF-κB）是近年发现的最重要的转录因 子之一。NF-κB存在于多种类型的细胞，参与机体的免疫反应和炎症反应[2，3] 。 本实验研究NF-κB在EMS患者外周血及腹腔液淋巴细胞中的表达，探讨NF-κB在 EMS发病机制中的作用及其与不同病变程度的关系，为后续针对NF-κB因子的EMS 治疗提供理论依据。 1 资料与方法 1.1 临床资料： 2003 年 12 月至 2004 年 3 月在四川大学华西妇产儿童医院行腹腔镜手术的 住院患者中，随机选取子宫内膜异位症患者作为病例组（EMS 组），非子宫内膜 异位症患者作为对照组 （如卵巢畸胎瘤，输卵管系膜囊肿，子宫肌瘤，盆腔粘连 不孕但非 EMS 症患者等）。病例纳入标准：具有相对规则的月经周期；6 个月内 未接受激素类药物治疗以及抗子宫内膜异位症药物治疗。排除标准：与纳入标准 不相符合的病例。 1.2 主要试剂：兔抗鼠 NF-κB （p65）抗体，链酶亲和素－生物素过氧化酶 （SABC） 试剂盒（羊抗兔）均购自武汉博士德公司。 -1- 1.3 标本收集： 1.3.1 外周血标本：手术当天清晨抽取外周血 2ml，肝素抗凝，缓慢加于等体积 的淋巴细胞分离液上 （上海恒信化学试剂有限公司），3000r/min 离心 20min，吸 出试管中间的一层乳白色液体，加入 0.85％氯化铵 0.5ml，轻轻振荡 2min，以 破碎红细胞。再加 PBS10ml，2500r/min 离心 10min，弃去上清液，反复 2 次。 用 PBS 调整细胞浓度为 2×107/L，取 30μl 滴于玻片上，室温风扇吹干，丙酮 固定 30min，干燥后－20℃保存。 1.3.2 腹腔液标本：腹腔镜手术置镜后，负压吸引直肠子宫陷凹处淡黄色或淡咖 啡色腹腔液 （若腹腔液较少可冲洗少量生理盐水），2500r/min 离心 10min，弃去 上层清亮液体，沉淀中加入 0.85％氯化铵 0.5ml，轻轻振荡 2min，以破碎红细 胞。将其缓慢加于等体积的淋巴细胞分离液上，3000r/min 离心 20min，吸出试 管中间的一层乳白色液体，加 PBS10ml，2500r/min 离心 10min，弃去上清液， 反复 2 次。用 PBS 调整细胞浓度为 2×107/L，取 30μl 滴于玻片上，室温风扇 吹干，丙酮固定 30min，干燥后－20℃保存。 1.4 免疫组织化学染色： SABC法步骤如下：3％H O 浸泡 10min，阻断内源性过氧化物酶。PBS洗 3 次。 2 2 正常山羊血清封闭 20min。滴加用 1％Triton稀释的一抗 100μl （1：200），4℃ 过夜。PBS洗后加生物素化