猪血药用物质基础研究（Ⅱ）-酶种类的选择.pdfVIP

氨基酸和生物资源 2010，32(1)：31～33 AminoAcids＆BioticResources 猪血药用物质基础研究(11)一酶种类的选择 任 艳，万德光，任小丹，张志丹，国锦琳 (成都中医药大学药学院成都 610075) 摘要 ：通过体外模拟体内条件 ，选取主要消化酶胃蛋 白酶、胰蛋白酶对猪血脱色液进行酶解 ，以高效酶木瓜蛋白酶和 1394 酶作为对照，结合酶解后多肽总含量以及 3kDa的多肽得率进行酶解效果的综合评价 ，得到胃蛋白酶为最佳酶解酶。 关键词：猪血；多肽 ；酶解；电泳 (SDS—PAGE) 中图分类号：R282．74 文献标识码：A 文章编号：1006～8376(2010】01—0031—03 猪血是一味具有较高药用价值的传统中药， 胃蛋 白酶，胰蛋 白酶，木瓜蛋 白酶，1394酶，福 《名医别录》 最早记载猪血的药用功效：“主猿豚 林酚，十二烷基硫酸钠，Acrylamide，N，N—Methylene 暴气，中风头眩，淋沥。”现代研究表明猪血有除尘 bisacrylamide，Tris，Tricine，五水硫酸铜，无水碳酸 排毒，降血压L2等作用，与古代本草中 “压丹石，解 钠，柠檬酸三钠，乙酸，甘油，氢氧化钠，以上皆为分 诸毒”、“治中风头眩”等主治功效不谋而合 J，这为 析纯 寻找猪血功能性物质基础提供了依据，并且研究表 1．1．3仪器 明，猪血降解产物多肽类具有生物活性 J。我国猪 3kDa、10kDa的Millipore离心筒，Mini—prote． 血资源丰富，但利用度极低，主要 由于其作用的物质 anm电泳仪 Anthelie紫外分光光度仪，SIM—F124 基础不明确，因此迫切需要我们深人研究，拓展其药 制冰机，Biofugeprimor冷冻离心机，170—8101凝 用价值 。 胶电泳分析系统 猪血的主要成分为蛋 白质，进人人体首先被消 1．2 实验方法 化酶消化成较稳定的多肽 (分子量范围是0．1kDa 1．2．1实验流程 ～ 10kDa)，其中具有生物活性的往往是分子量小于 脱色液 (取4份，每份 10mE)一 胃蛋白酶、胰蛋 10kDa，特别是3kDa以下的小肽，有研究表明这类 白酶、木瓜蛋 白酶、1394酶酶解 (T：40~C，t=6h) 小肽易被人体吸收 J。本实验通过体外模拟体 内 一灭酶 (T=90~C，t=30min)一离心 (4000g×40 消化条件，对初步酶解脱色的脱色液进行进一步的 min)一 取上清液(补足至同一体积 10mL)一用 10 酶解，选择常见的高效酶木瓜蛋 白酶和 1394酶作为 kDa、3kDa的millipore滤膜先后进行超滤 对照，人体内主要消化酶胃蛋白酶、胰蛋白酶同时进 用SDS—PAGE电泳，lowry法两种方法分别进 行试验。通过对最终酶解液的多肽含量和它们的分 行分子量范围追踪和含量检测。 子量范围进行测定，以小于3kDa的肽含量为评价 1．2．2测定方法 标准，从而选择最为合适的酶，对酶的水解条件进行 1．2．2．1超滤分离 进一步优化，为下一步的物质基础研究提供相关依 为了去除大分子的干扰，得到分子量小于 1O 据。 kDa和3kDa的肽 ，选择 10kDa和 3kDa的滤膜进