一步法RT―PCR克隆水稻线粒体磷转运蛋白基因及其序列特征分析.pdfVIP

热带亚热带植物学报 2005，l3(4)：303—309 Journa／ofTropicalandSubtropicalBotany 一 步法RT—PCR克隆水稻线粒体磷转运蛋白基因 及其序列特征分析 王 峰，黄璐圆，王宏斌，刘 兵，王金发 f巾山大学有害牛物控制 资源利用闻家重点实验室，基因工程教育部重点实验室，牛命科学学院，广州 510275) 摘要 ：以水稻广亲和品种Cpslol7幼穗为材料 ，用一步法RT—PCR(逆转录聚合酶链式反应)克隆了一个长度为 lll8bp 的编码线粒体磷转运蛋 白的OsMPT基因。序列分析表明其包含了基因完整的编码序列，编码 由368个氨基酸组成的 线粒体磷转运蛋 白，它与玉米、大豆、Lotusaponicus、Betulapendula、拟南芥的线粒体磷转运蛋 白氨基酸序列相似率 分别为 93．5％，85．6％，83．8％，83．7％，81．1％。氨基酸疏水谱分析显示它有线粒体磷转运蛋 白家族高度保守的6个跨 膜结构域。水稻线粒体磷转运蛋白N端富含精氨酸 (Axginine)、丙氨酸 (Alanine)和丝氨酸 (Sefine)。iPSORT预测 其蛋 白N端具有定位于线粒体的信号肽序列，进一步分析表明此编码区段有 6个外显子和 5个 内含子。RT—PCR结果 表明，OsMPT基因在水稻两个亚种粳稻和籼稻的叶片中均有表达，在 Cpslol7营养器官和生殖器官中都有高水平表 达。水稻线粒体磷转运蛋白的克隆和表达分析将为研究其结构和生物学功能奠定基础。 关键词：水稻；线粒体磷转运蛋 白；序列分析；基因组结构；RT—PCR 中图分类号 ：Q785 文献标识码 ：A 文章编号：l005—3395(2005)04—0303—07 CloningandSequenceAnalysisofRiceM itochondrialPhosphate TransporterGenebyOne-s·tepRT--PCR WANG Feng，HUANG Lu-yuan，WANG Hong．bin，LIU Bing，WANG Jin．fa’ (TheStateKeyLaboratoryofBiocontrol，theKeyLaboratoryofGeneEn neeringofMinistryofEducation,SchodofL Sciences SunYat-$elzUniversity，Guangzhou510275，China) Abstract： Gene—specificprimersweredesignedaccordingtotheknownsequenceofmitochondrialphosphate transportergene(MPT)，andtherice P71(OsMPT)cDNArfagmentoflll8bpwasclonedbyOne-stepreverse transcriptionPCR(RT-PCR)rfomCpslol7，awide-compatibilityvarieytofrice(Oryzasativ ．DNAsequencing analysisindicatedthatitcardedanentireopenreadingrfameandencodedaproteinof368aminoacidresidues ． ThededucedaminoacidsequenceofOs脚 showedsimilaritiesof93．5％，85．6％，83．8％，83 ． 7％ and81．1％with