DNA重组技术的基本工具(41页).ppt

资料分析 基因工程概念 基因工程是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 由于基因工程是在DNA水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术或基因拼接技术 基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新 阅读课本：科技探索之路 “基础理论和技术发展催生了基因工程” 此转基因实验实现了哪种生物的哪些性状在另外哪种生物中表达？ 性状的表达与我们从前学过的什么过程有关？ 要实现抗虫基因在棉花中的表达，要提前做哪些关键工作? 限制性内切酶作用过程 6、作用部位： DNA连接酶的作用过程 　 作用： 种类： 本质都是 ： 条件： 1、种类： 2、作用： 将双链 DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 ,这样一个重组的DNA分子就形成了。 二、“分子缝合针”──DNA连接酶 DNA连接酶作用部位 DNA连接酶作用部位 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 限制酶切割后有两种不同的结果，一种产生黏性末端，一种产生平末端。那么恢复它们的连接时，所用DNA连接酶是否可以不加选择？ 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， E·coli DNA连接酶　　　　　　　　或T4DNA连接酶 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 T4DNA连接酶 3、 E·coli DNA连接酶与T4 DNA连接酶比较： 来源 T4DNA连接酶 E·coliDNA连接酶 类型 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 4、特点： 5、结果： 对末端类型有专一性要求， 对碱基序列无专一性要求 脱水缩合形成磷酸二酯键 DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？ P6寻根问底 答：不是一回事。DNA连接酶和DNA聚合酶都是形成磷酸二酯键，二者的差别主要表现在： （1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。 （2）DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。 此外，二者虽然都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。 DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 双链 单链 连接部位 在两DNA片段之间形成磷酸二酯键 将单个核苷酸加到已存在的核苷酸片段的3’末端的羟基上，形成磷酸二酯键 作用结果 完整DNA分子 单链DNA 作用对象 游离双链DNA片段 游离脱氧核苷酸 区别 DNA解旋酶 限制酶 限制性内切酶与DNA解旋酶的区别 切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯键 将DNA两条链的氢键打开形成两条单链 限制性内切酶与DNA连接酶的区别 基因进入受体细胞的载体 　　 要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！ 双链DNA 质粒、噬菌体和动植物病毒 将外源基因送入受体细胞。 三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” * * * * 想象空间 ？ 位于费城托马斯·杰斐逊大学的希拉里和她的同事成功地将人体狂犬病抗体的DNA译码移入烟草作物中。  这种烟草作物可以产生一种人体蛋白质，而这种物质能抗击致命性的狂犬病病毒。  基因工程？基因工程的目的？ 定向改造生物！ 基因工程的概念 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 操作环境 原理 操作水平 基本过程 优势 理论基础 生物体外 基因重组 DNA分子水平 剪切→拼接→导入→检测表达 定向改造生物性状，打破物种界限， 克服远缘杂交不亲和的障碍 遗传密码的通用性 通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向改造生物的遗传性状。 转鱼抗寒基因的番茄 转基因鲑鱼 抗虫害的玉米 能发荧光的热带斑马鱼 普通热带斑马鱼是不发荧光的 转黄瓜抗青枯病基因的甜椒 乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷) 基因工程诞生的基础 一、基础理论的重大突破 1.生物遗传物质—DNA的发现 2. DNA双螺旋结构和中心法则的确立 3.遗传密码的破译 二、技术发明使基因工程的实施成为可能 1.基因转移载体的发现