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苦马豆素对小鼠细胞免疫功能的影响 张志敏，王建华，赵兴华，耿果霞，余永涛，刘志斌，马保华，赵晓娥 西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌（712100 ） E-mail ：zzmv168@ 摘 要：目的：探索SW 与细胞免疫功能之间的关系，为SW 的免疫毒理学研究提供新的研究思路。 方法：将80 只小鼠随机分为8 组，5 个试验组按0.05 、0.2、0.8、3.2 和6.4 mg/kg 灌服含SW 的生 理盐水，连续21 d ，检测淋巴细胞的增殖活性、脏器指数、血液细胞等；另3 组为生理盐水、环磷 酰胺和正常对照组。将正常组小鼠脾淋巴细胞，分别与0.002、0.02 、0.2、2 和4 µg/mL 的SW 共培 养，检测淋巴细胞的增殖活性。结果：随着SW 浓度增加，小鼠脾脏淋巴细胞未受丝裂原刺激和ConA 作用时 SI 值先增大后减小，PHA-P 作用时 SI 值呈剂量依赖性减小；LPS 作用效果不明显；胸腺指 数先增大后减小；血细胞数量减少。结论：SW 剂量大于6.4 mg/kg ，连续21 d 灌胃，对小鼠细胞免 疫功能起负面影响；SW 浓度超过4 µg/mL 对淋巴细胞的增殖功能起负面影响；低浓度 SW 对淋巴 细胞功能具有一定的增强作用。基于SW 不同剂量和同一作用剂量时对不同丝裂原刺激时结果不同， 推测，SW 对免疫功能的影响具有选择性和双向调节作用，该作用与SW 的剂量有关。 关键词：苦马豆素，淋巴细胞，免疫器官，血液，小鼠 疯草（Locoweed ）是豆科黄芪属（Astragalus ）和棘豆属（Oxytropis）有毒植物的总称，也是世 界范围内危害草原畜牧业生产最为严重一类毒草，在中国主要分布于西部草原，危害严重[1,2] 。苦马 豆素（swainsonine, SW ）是疯草的主要有毒成分，最早由Colegate 等[3]从灰苦马豆中分离得到，主 要通过抑制溶酶体 α-甘露糖苷酶活性而使细胞内低聚糖代谢发生改变，SW 也可通过抑制高尔基体 内α-甘露糖苷酶Ⅱ的活性，而影响N-连接糖蛋白的新陈代谢过程[4] 。糖蛋白新陈代谢过程在机体发 挥免疫调节中起重要作用，因此研究SW 对免疫器官、免疫细胞功能的影响，对探讨SW 体内、外 对免疫功能的影响机理具有重要意义，也为SW 的免疫毒理学研究提供理论基础。童德文等[5,6]发现， SW-BSA 可诱导机体产生抗SW 的抗体，并对疯草中毒的山羊有一定的保护作用，说明SW 连接到 大分之载体蛋白上可以诱导出免疫原性，能够刺激机体的体液免疫功能。但 SW 体内、外对免疫功 能的研究结果并不一致。家畜疯草慢性中毒时，引起免疫器官发生病变[7] [8] 、淋巴细胞空泡变性 、数 量减少[9] [10] [11] [12] [13] 、活性降低 等。抗肿瘤研究结果表明，SW 可抑制肝癌 、胃癌 和食道癌 等的生长 和转移，增强NK 细胞[14]和LAK[15]细胞对肿瘤细胞的杀伤力。目前SW 对神经系统、循环系统、排 泄系统和生殖系统等的毒性研究报道较多，但免疫毒性的研究并不深入。SW 是否对机体的淋巴细 胞功能有影响，该影响是否具有剂量效应关系，SW 的体内、外作用是否一致，这些疑问目前尚未 解决。本研究以SW 为材料，昆白系小鼠为研究对象，用灌胃法研究不同剂量SW 对小鼠脾淋巴细 胞增殖功能、免疫器官发育、血液细胞数量及 SW 对正常小鼠淋巴细胞增殖功能影响的剂量效应关 系，以探讨SW 对细胞免疫功能影响规律及其机制，为SW 的免疫毒理学研究提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 SW 的来源及配制 SW，西北农林科技大学生物毒素与分子毒理学研究实验室制备，用灭菌生理盐水配成所需浓度。 1. 2 主要试剂及仪器 刀豆蛋白 A （ConA ）、植物血凝素P （PHA-P ）、脂多糖（LPS ）、四甲基偶氮唑盐（MTT ）均 购自 Sigma