甲基对硫磷水解酶基因高效表达及酶活性分析.pdfVIP

2004年31(6) 微生物学通报 甲基对硫磷水解酶基因的高效表达及酶活性分析 刘璐璐周亚凤 张治平刘 虹 张先恩。 (中国科学院武汉病毒研究所武汉4姗1) 摘要：假单胞菌wBc．3的甲基对硫磷水解酶基因嘶在大肠杆菌系统删(DE3)， pEl32a(+)中实现了高效可溶性融合表达。表达的重组酶能够有效地被亲合层析纯化。 酶学性质分析表明，重组酶对底物乙基对硫磷水解能力较野生酶相比有近4倍的提高，对 甲基对硫磷和杀螟松的水解活力无明显变化。以融合蛋白形式存在的重组酶在室温及4℃ 下的贮存稳定性明显优于野生型酶。 关键词：有机磷水解酶，硫氧还蛋白，融合表达 中图分类号：Q814．1文献标识码：A 文章编号：0253．2654(2004)06_0cr77．06 P嗣悯胁ion H瞰粕磐啪憾G呲D掣嘲醯嘶ofMeⅡlyl Hy由ok怫锄d ofme A瑚dysis El硒咖eAc吐vi锣 删khl跚OU m州GⅪ趾_EIl+ 姗Hong Ya_Fe甥m心G蕊一啦 (№m痂腑矿临魄y，a矗黜爿∞幽可旷妇踯，‰430cr71) Ab醴眦：M酬删吼吣妇(MPH，E．c．3．1．8．1)溅舭啦‰胁锄螂印．贼一3，isol砒- ed锄did脚曲ed by叫lab，惴鲫c。蛐镧删ill 觚册胁at fold h油M．’nIe胤砌陆l舢tⅧ)H删ne耐y4～5lli扣specmcacti嘶to删加th舭血e t}l∞Id the ∞zyme如m addi6∞，the Iecor曲h∞t R∞幽m∞。叩．WB(：-3．hl gIal岫0f e11EyrIlew∞iII掣m硝Ⅲ一’ wimtllewdd paring ty】pe即zyme． K叮啪柑s：m驴珊phosl)hon坞d镏捌iIlg即可nle，m佣，c觇n，Fhsioll懿pI鹄sion 微生物能够降解有机磷农药u。]。2001年我们筛选出一株甲基对硫磷降解菌，命名 假单胞菌(＆舭，麟sp．)WBc一3，它可以彻底降解甲基对硫磷，并以甲基对硫磷为 唯一碳源和氮源生长HJ，所分离得到的甲基对硫磷水解酶(Metllylp越曲ionhydmlase， MPH，E．c．3．1．8．1)还可以降解乙基对硫磷，杀螟松和毒死俾。该酶对甲基对硫磷水 解酶的比活性是对乙基对硫磷水解酶比活性的15倍[5]。对应MPH的基因区段已经从假 单胞菌中定位，并克隆到大肠杆菌pUc一18／DH5a。‰以Dmonns sp．wBc．3是天然进化 功地实现了M1)H在异源宿主中的大量表达，获得重组MPH，通过对重组酶的酶学性质 分析意外地发现，重组酶对底物一乙基对硫磷的催化动力学常数发生了较大变化。本 文报道有关实验结果。 ’联系人Td：027-87lsr7105，F酲：027Bmail：妇秘@mail．Illost．秽．∞ 收稿日期：2004一吆．29，修回日期：20啤明．兹 万方数据 微生物学通报 2004年31(6) 1材料与方法 1．1菌株，质粒及主要试剂