液相色谱2-分配、离子交换、凝胶.ppt

第二节 分配色谱;一、基本原理;2、分配色谱原理 （1）固定相为液体 将某种溶剂涂布在吸附剂颗粒表面或纸纤维上，形成一层液膜，称为固定相。 吸附剂颗粒表面或纸纤维叫载体或担体。 根据组分在两相中的溶解度不同而分离。 （2）“相似相溶”原则 极性物质在极性溶剂中溶解度大，K大； 非极性物质在非极性溶剂中溶解度大，K大。 （3）分配定律与分配等温线 （4）分配色谱的特点： a、重现性 b、峰对称 c、无强烈滞留现象. 几乎适用于各种类型的化合物，特别适宜于亲水性物质，如极性较大的生物碱、苷类、有机酸、糖类及氨基酸的衍生物等。 ;二、载体;三、固定相和流动相的选择;反相分配色谱：固定相的极性小于流动相的极性。 固定液：硅油、液体石蜡等极性较小的有机溶剂。 流动相：水、各种水溶液（酸、碱、盐及缓冲液）、与水混合的有机溶剂。 洗脱顺序:极性小的组分保留作用强；极性大的组分保留作用弱 ;四、分配色谱操作注意事项;第三节 离子交换色谱法(ion exchange chromatography);（2）离子交换过程 水溶液中（流动相中）的各种离子，可与离子交换树脂上固定的离子基团结合，使原来与其结合的离子被置换，进入流动相而发生置换。;2、分离机理 （1）不同的离子与交换树脂的结合力不同，从而固定相对它的保留能力不同，从而造成差速迁移。 （2）离子交换平衡： ;二、离子交换树脂;2、离子交换树脂的类型 （1）阳离子交换树脂 — 可交换的离子为阳离子。 氢型、钠型 强酸型、弱酸型、中强酸型（－COOH、－PO3H、－SH） 例如：磺酸型 R-SO3－H+ (pH范围宽) ** 应注意pH范围，否则交换容量急剧下降。 （2）阴离子交换树脂 — 可交换的离子为阴离子。 按不同碱性分： 强碱型（季胺基团）—NR3+ (pH11) －NH2, －NHR,－NR2等 (pH8) 按可交换的离子分：氢氧型、氯型;3、离子交换树脂的特性 ① 交联度：表示交联剂在离子交换树脂中所占的百分含量，通常使用4～12%的树脂。 交联度大：树脂孔小，刚性强，孔穴多，离子基团多，溶胀小。 适合于体积较小的无机离子的分离 交联度小：树脂孔大，刚性差，渗透性好。 适合于体积较大的有机离子的分离 ② 溶胀：树脂内极性基团吸水性极强，大量的水进入树脂内部，产生膨胀，叫溶胀。 溶胀程度与树脂类型、交联度有关。 因此，严禁干法装柱。;;三、经验规则（亲和力大小规则）;四、流动相;2、对分离的影响 ①流动相主要影响组分离子和交换基团形成离子对的过程 ② pH对弱酸、弱碱的影响 影响其离解平衡，即控制了组分形成离子的程度： [离子]组分↑，则K’↑； [离子]组分↓，则K’ ↓ 不同离子交换剂的pH适用范围： 强酸型：较宽; 强碱型：pH11; 弱酸型:pH6; 弱碱型：pH8;③ 离子强度的影响(盐类浓度) 离子强度↑，溶剂强度↑，洗脱能力↑。 ④ 平衡离子(即流动相中的盐类)的影响 它的种类可影响分离的选择性，浓度影响溶剂强度；它们与树脂的亲合力不同，从而影响组分的相对保留值： a. 离子浓度相同时，高电荷离子与交换基团亲合力大 b. 同价离子，原子量增大亲和力增加 c. 水合离子半径越小，亲和力越大。 ;3、流动相的选择（淋洗液） ① 用去离子水溶解淋洗剂配制而成 淋洗剂为电解质（含阳离子、阴离子），其中对分离起实际作用的称淋洗离子： 如NaCO3水溶液为流动相，分离无机阴离子时，Na2CO3是淋洗剂，CO32－是淋洗离子。 ② 选择的基本原则： 理论上：淋洗离子与树脂的亲和力应接近或稍高于被测离子。 实际：样品组分中有强保留离子和弱离子时，若选择与保留最强的离子的亲和力接近的淋洗离子，弱保留的离子会很快流出色谱柱，不能达到分离。 所以根据样品组成，通过实验选择。;五、应用;第四节 空间排阻色谱（凝胶色谱）;一、基本原理 1、分离机理 （1）前三种是亲和力不同而分离； （2）凝胶色谱中组分与固定相之间无作用力，只是根据分子量大小来分离； （3）凝胶 — 有一定的孔径分布范围的多孔物质。组分进入柱内后，全向固定相的孔中扩散，保留程度取决于孔和组分分子的大小。 小分子:将全部渗入细孔中,在流经柱时,经历的路程最长. 中等大小分子:渗入部分较大的孔隙,而被较小的孔隙排斥,经历的路程居中. 大分子:完全被排斥在空隙外,经历的路程最短.;;Size Exclusion Chromatography;2、分配系数和保留值 (1) 分配系数K 组分进入柱子，从高浓度的流动相中向固定相孔隙内扩散，扩散平衡时 ;（2）保留值 保留方程 VR = Vm + KVS 在凝胶色谱中