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液相色谱2-分配、离子交换、凝胶.ppt

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第二节 分配色谱;一、基本原理 ;2、分配色谱原理 (1)固定相为液体 将某种溶剂涂布在吸附剂颗粒表面或纸纤维上,形成一层液膜,称为固定相。 吸附剂颗粒表面或纸纤维叫载体或担体。 根据组分在两相中的溶解度不同而分离。 (2)“相似相溶”原则 极性物质在极性溶剂中溶解度大,K大; 非极性物质在非极性溶剂中溶解度大,K大。 (3)分配定律与分配等温线 (4)分配色谱的特点: a、重现性 b、峰对称 c、无强烈滞留现象. 几乎适用于各种类型的化合物,特别适宜于亲水性物质,如极性较大的生物碱、苷类、有机酸、糖类及氨基酸的衍生物等。 ;二、载体;三、固定相和流动相的选择;反相分配色谱:固定相的极性小于流动相的极性。 固定液:硅油、液体石蜡等极性较小的有机溶剂。 流动相:水、各种水溶液(酸、碱、盐及缓冲液)、与水混合的有机溶剂。 洗脱顺序:极性小的组分保留作用强;极性大的组分保留作用弱 ;四、分配色谱操作注意事项;第三节 离子交换色谱法 (ion exchange chromatography) ;(2)离子交换过程 水溶液中(流动相中)的各种离子,可与离子交换树脂上固定的离子基团结合,使原来与其结合的离子被置换,进入流动相而发生置换。;2、分离机理 (1)不同的离子与交换树脂的结合力不同,从而固定相对它的保留能力不同,从而造成差速迁移。 (2)离子交换平衡: ;二、离子交换树脂 ;2、离子交换树脂的类型 (1)阳离子交换树脂 — 可交换的离子为阳离子。 氢型、钠型 强酸型、弱酸型、中强酸型(-COOH、-PO3H、-SH) 例如:磺酸型 R-SO3-H+ (pH范围宽) ** 应注意pH范围,否则交换容量急剧下降。 (2)阴离子交换树脂 — 可交换的离子为阴离子。 按不同碱性分: 强碱型(季胺基团)—NR3+ (pH11) -NH2, -NHR,-NR2等 (pH8) 按可交换的离子分:氢氧型、氯型;3、离子交换树脂的特性 ① 交联度:表示交联剂在离子交换树脂中所占的百分含量,通常使用4~12%的树脂。 交联度大:树脂孔小,刚性强,孔穴多,离子基团多,溶胀小。 适合于体积较小的无机离子的分离 交联度小:树脂孔大,刚性差,渗透性好。 适合于体积较大的有机离子的分离 ② 溶胀:树脂内极性基团吸水性极强,大量的水进入树脂内部,产生膨胀,叫溶胀。 溶胀程度与树脂类型、交联度有关。 因此,严禁干法装柱。;;三、经验规则(亲和力大小规则);四、流动相;2、对分离的影响 ①流动相主要影响组分离子和交换基团形成离子对的过程 ② pH对弱酸、弱碱的影响 影响其离解平衡,即控制了组分形成离子的程度: [离子]组分↑,则K’↑; [离子]组分↓,则K’ ↓ 不同离子交换剂的pH适用范围: 强酸型:较宽; 强碱型:pH11; 弱酸型:pH6; 弱碱型:pH8;③ 离子强度的影响(盐类浓度) 离子强度↑,溶剂强度↑,洗脱能力↑。 ④ 平衡离子(即流动相中的盐类)的影响 它的种类可影响分离的选择性,浓度影响溶剂强度;它们与树脂的亲合力不同,从而影响组分的相对保留值: a. 离子浓度相同时,高电荷离子与交换基团亲合力大 b. 同价离子,原子量增大亲和力增加 c. 水合离子半径越小,亲和力越大。 ;3、流动相的选择(淋洗液) ① 用去离子水溶解淋洗剂配制而成 淋洗剂为电解质(含阳离子、阴离子),其中对分离起实际作用的称淋洗离子: 如NaCO3水溶液为流动相,分离无机阴离子时,Na2CO3是淋洗剂,CO32-是淋洗离子。 ② 选择的基本原则: 理论上:淋洗离子与树脂的亲和力应接近或稍高于被测离子。 实际:样品组分中有强保留离子和弱离子时,若选择与保留最强的离子的亲和力接近的淋洗离子,弱保留的离子会很快流出色谱柱,不能达到分离。 所以根据样品组成,通过实验选择。;五、应用 ;第四节 空间排阻色谱 (凝胶色谱);一、基本原理 1、分离机理 (1)前三种是亲和力不同而分离; (2)凝胶色谱中组分与固定相之间无作用力,只是根据分子量大小来分离; (3)凝胶 — 有一定的孔径分布范围的多孔物质。组分进入柱内后,全向固定相的孔中扩散,保留程度取决于孔和组分分子的大小。 小分子:将全部渗入细孔中,在流经柱时,经历的路程最长. 中等大小分子:渗入部分较大的孔隙,而被较小的孔隙排斥,经历的路程居中. 大分子:完全被排斥在空隙外,经历的路程最短.;;Size Exclusion Chromatography;2、分配系数和保留值 (1) 分配系数K 组分进入柱子,从高浓度的流动相中向固定相孔隙内扩散,扩散平衡时 ;(2)保留值 保留方程 VR = Vm + KVS 在凝胶色谱中

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