应用改进通用荧光PCR引物进行多重STR分型.pdfVIP

维普资讯 动物学杂志 ChineseJournalofZoology 2008，43(3)：75～8O 应用改进的通用荧光 PCR引物 进行多重 STR分型 张 超① 范忠鹏① 朱旺升① 赵 莹①② 陈绅波① 李 凯① 周宇苟① 肖君华①② (① 东华大学化学化工与生物工程学 院 生物科学与技术研究所 上海 201600； ② 上海市实验 动物研究所，复旦大学，东华大学模式动物生物 多样性联合实验室 上海 201200) 摘要 ：通过设计通用荧光 PCR引物并结合 DNA测序系统建立 了小 鼠的多重 STR分型方案 。实验针对 小 鼠基 因组设计 了两对不 同的通用 引物序列 ，标记 了FAM荧光 的通用序列和 “加尾 ”的位点特异性引物 共同用于小 鼠的多重 PCR的STR基 因分型。本研究优化 了通用引物和特异性引物 间的比例 ，优化 了多 重 STR，PCR的反应条件 ，并最终利用该技术方案实现 了五重 STR分型。实验验证 了该方案在多重 STR 分型中的可行性。与传统的荧光检测PCR产物方案相 比，应用通用方案完成多重PCR反应大大节省了 实验时问与经费。 关键词 ：通用引物 ；STR；多重 PCR；基 因分型 中图分类号 ：Q81 文献标识码 ：A 文章编号 ：0250，3263(2008)03．75，06 MultiplexSTR Genotypingwith Improved Universal FluorescentPCR Primers ZHANG Chao① FAN Zhong—Peng① ZHU Wang—Sheng① ZHAO Ying①② CHEN Shen—Bo① LIKai① ZHOU Yu — Xun① XIAO Jun-Hua①② (① m eofBiologyscen Technology，DonghuaUniversity，Shanghai 201600； ② JointLaboratoryofModelAnimalBiodiversity，Shanghai 201200，China) Abstract：This study established a multiplex STR genotyping system through universalfluorescentprimers in combinationwith sequencing．Foreachpanelofmultiplex STR genotypingamplification，twosetsofprimers were used，namelyuniversal primers labeled with FAM and specificprimers with an added5 tail．W eoptimized the proportionofuniversaland specificprimers and reactionofmultiplexPCR wasachieved．Byusing thismethod，five STR markerlocigenotypingweresuccessfullyconductedwihtinasinglereaction．Th eoptimizeduniversal fluorescent primers amplificationgenotypingsystem canbeusedinmultiplexSTR genotyping，whichallowsreliable，effectiveand low-costgenotypingcomparedwiht regularmicrosatellitefluorescentdetectionassays． Key words：Universal primers；STR；Multiplex polymerasechainre