碳源和氮源对木蹄层孔菌产漆酶的影响及酶学性质研究.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（１１）：３２３７ 碳源和氮源对木蹄层孔菌产漆酶的 影响及酶学性质研究 １，２ ２ ２  尚　洁 　吴秋霞 　练小龙 　王秋玉 （１东北林业大学生命科学学院　哈尔滨　１５００４０２北方民族大学生物科学与工程学院　银川　７５００２１） 摘要　对不同碳源和氮源及碳氮比对木蹄层孔菌产漆酶的影响进行了研究，以提高漆酶产量，同 时分析了该漆酶的酶学性质。漆酶合成的最适碳源是麦麸，最适氮源是蛋白胨，Ｃ∶Ｎ为１０．４，优 化后漆酶产量增加了约７．８８倍；反应最适ｐＨ为３．０，最适反应温度为５０℃，Ｋ 为０．２０ｍｍｏｌ／Ｌ， ｍ Ｖ 为２．５８ｍｍｏｌ／Ｌ·ｍｉｎ；ＤＴＴ０．１ｍｍｏｌ／Ｌ和ＮａＮ １０ｍｍｏｌ／Ｌ几乎能抑制漆酶全部活性，终浓度 ｍａｘ ３ ２＋ ２＋ ２＋ ２＋ 为１０ｍｍｏｌ／Ｌ的Ｂａ ，Ｃａ ，Ｃｏ 和Ｆｅ 也几乎能抑制该酶的全部活性。该研究将为木蹄层孔菌 漆酶的生产及在环境工程领域的应用提供基础信息。 关键词　木蹄层孔菌　漆酶　碳源和氮源　酶学性质 中图分类号　Ｘ１７２ 　　漆酶（ＥＣ１．１０．３．２）是一类含铜氧化酶，现已发现 白腐真菌木蹄层孔菌产漆酶的影响，同时分析了粗酶 存在于多种植物和微生物中。漆酶也是白腐真菌降解 液的酶学性质，为进一步提高该菌漆酶产率、降低生产 ［１］ 成本和漆酶工业化生产与应用提供研究基础。 木质素的主要酶之一 。白腐真菌大多合成过氧化氢 酶和多酚氧化酶，它是已知的唯一能将木质素降为ＣＯ ２ １　材料与方法 和ＨＯ的一类微生物。白腐真菌酶系是非特异性和非 ２ 立体结构选择性酶，具有独特的降解机理，除对木质素 １．１　试验材料 有降解作用以外，还对众多结构各异的有机物大分子 　　木蹄层孔菌采自东北林业大学帽儿山实验林场， ［２］ 保存于东北林业大学遗传学实验室。 物质如多芳香族化合物 、氯化芳香族化合物、农药和 染料等表现出独特的降解敏感性。白腐真菌由于其独 　　马铃薯葡萄糖琼脂（ＰＤＡ）培养基：马铃薯２００ｇ，葡 特的降解能力，展现了巨大的潜在应用前景，引起了学 萄糖２０ｇ，琼脂２０ｇ，蒸馏水定容到１Ｌ，自然ｐＨ。 ［７］ 术界和工业界的极大兴趣。 　　液体培养基：以 Ｔｉｅｎ＆Ｋｉｒｋ 培养基为基础培 　　木蹄层孔菌 （Ｆｏｍｅｓｆｏｍｅｎｔａｒｉｕｓ）是担子菌纲 养基。 （Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ）的一种白腐真菌。木蹄层孔菌降解木 １．２　粗酶液的制备 质素所产的酶主要是漆酶（Ｌａｃ）和锰过氧化物酶 　　将木蹄层孔菌接种到ＰＤＡ培养基上，培养７ｄ，待 （Ｍｎｐ），而木质素过氧化物酶（Ｌｉｐ）所产的量很少。刘 菌丝铺满培养皿，取２个直径为６ｍｍ的菌饼，置于装有 ［３］ １５ｍｌ液体培养基的２５０ｍｌ三角瓶中，于２８℃避光静置 欣等 研究发现木蹄层孔菌具有改造成造纸业原料处 理的工程菌的潜在优势。现今，白腐真菌己被广泛地 培养。振荡培养时，将菌种接入装有４５ｍｌ液体培养基 应用于污染物处理、染料脱色、生物燃料、制浆造纸、食