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第 7卷第 6期 ． 过 程 工 程 学 报 V 1．7No．6
2007年 12月 TheChineseJournalofProcessEngineering Dec 2007
argE基因的表达优化及Zn添加时间和浓度的影响机制分析
李 环， 陈 悦， 翁秋萍， 朱大伟， 韦 萍
(南京工业大学制药与生命科学学院，江苏 南京 210009)
摘 要：确定了目的基因argE在重组菌BL21(DE3)．pET22b．argE中的表达位置，研究了Zn对重组菌生长及表达产
物活性的影响，并分析了影响机制．结果表明，argE可在重组菌中高效表达，表达产物 N．乙酰鸟氨酸脱酰基酶大多
以不可溶的包涵体形式存在，只有少量为有活性的可溶性表达．1．0g／L的Mg对重组菌的生长及酶活有明显促进作用．
zn2加入时机及加入量不同，影响结果也不同．发酵起始加入zn严重抑制菌的生长及酶活，而在 1．0％乳糖诱导2．5h
后加入则可解除生长抑制并提高酶活．SDS—PAGE电泳及活力测定证实zn2参与形成酶的催化中心，对酶的表达量没
有影响．
关键词：argE基因；表达优化；Zn2加入时机；影响机制；活性表达
中图分类号：Q93 文献标识码：A 文章编号：1009—606x(2007)06—1187—05
1 前 言 拆分作用的NAOase国外研究甚少，国内未见报道．基
于此背景，本实验室构建了可表达 NAOase的重组菌
大肠杆菌中argE基因编码的N．乙酰鸟氨酸脱酰基
BL21(DE3)．pET22b．argE．本工作在确定 了培养基成分
酶 (N．acetylornithinedeacetylase，NAOase，EC3．5．1．16)催
及重组 NAOase表达形式的基础上，重点研究了Zn2+
化N．乙酰鸟氨酸脱去乙酰基，生成L．鸟氨酸 【“．该反应
加入时间及浓度对重组菌生长及酶活性的影响．表达优
是精氨酸和多胺类物质合成的共同步骤．多胺与 DNA
化后重组NAOase的活性从37℃时的2．27U／mL提高到
复制及细胞分裂有关，NAOase的活性对细菌繁殖必不
173．14U／mL，已具备一定的应用价值．
可少2『．3J．真核生物合成精氨酸的途径和原核不同，不含
NAOase．故有可能研制出一种新型抗生素，能抑制原核 2 材料与方法
生物 argE基因的表达过程或表达产物的活性，而对人
2．1主要试剂及原料处理
类或动物没有影响．对 NAOase结构的研究具有潜在的
蛋白胨、酵母膏为 Oxoid公司生产，异丙基．B．D．
医药应用价值l3J．
硫 代 半 乳 糖 苷 (Isopropyl-p-D-thiogalactopyranoside，
早在 1956年，Vogel等 6】『就报道了大肠杆菌中
IPTG)由BB1分装，其余试剂为能够得到的最大纯度产
NAOase的存在及部分酶学性质，指出co和谷胱苷肽 品．
对其酶活有促进作用．Me
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