CbDREB1A基因表达载体构建及转化水稻光温敏核不育系研究.pdfVIP

杂交水稻 (HYBRIDRICE)，2009，24(6)：49—53 ·49· ． 基础 理 论 · Basicresearch CbDREB1A基因表达载体构建及转化水稻 光温敏核不育系的研究 陈浩东 一，罗伯祥 ，陈 芬 ，蒋建雄 ，李文彬 ，肖国樱 (1．湖南农业大学 生物科学技术学院，湖南 长沙 410128；2．中国科学院 亚热带农业生态研究所，湖南 长沙 410125； 3．中国科学院遗传与发育生物学研究所，北京 100101) 摘 要：为了增强荠菜DREB1A基因在转基因水稻中的表达，构建了由Ubi启动子驱动的植物表达载体pUflCbDREB3300。通过 基因枪转化法将 CbDREBIA基因导入水稻光温敏核不育系4008S，获得5个抗干旱胁迫的再生植株。运用PCR及Southern杂交技 术对抗性再生植株进行鉴定，结果显示CbDREBIA基因已整合到水稻基因组中。干旱胁迫后转基因水稻植株脯氨酸含量显著高 于对照，显示耐旱性增强。 关键词：CbDREB1A基因；Ubiquitin启动子；载体构建；基因转化；水稻光温敏核不育系 中图分类号：$511．Ol；Q78 文献标识码 ：A 文章编号：1005—3956(2009)06—0049—05 干旱、高盐、低温是植物在其生长过程中经常遇 力。但使用的启动子来源于双子叶植物，其调控的 到的非生物胁迫。在受到这些胁迫时，某些与逆境 目的基因在水稻中的表达活性并不高，因此，构建一 相关的基因会受到转录因子的调控 ，翻译成对细胞 种适合在单子叶植物中表达的载体用于水稻耐逆境 起重要保护作用的蛋 白质；而一些与逆境不相关的 性状改良研究，可能会取得更好的效果。 基因则会被转录因子关闭，以减少逆境中细胞的消 本研 究拟 通过构 建 Ubi启动 子驱 动荠菜 耗 卜 。 DREB1A基因的载体，并将其转入水稻，以获得抗逆 1994年，Yamaguchi等 对拟南芥 rd29A基因 性较强的转基因水稻新种质。 的启动子区进行分析，发现了一个新的顺式作用元 1 材料与方法 件DRE(DehydrationResponsiveElement)，并检测到 与DRE结合的蛋 白质因子，即DREB(Dehydration 1．1 实验材料 ResponsiveElementBindingProtein)转录因子，揭示 大肠杆菌 DH5ot菌株 由本实验室保存。质粒 了一条不依赖于ABA的信号转导途径。DREB1A pUI2GUS(含 启动子和 增强子)由中国科学院 是这一信号途径中的一个重要的转录因子，虽然它 遗传与发育生物学研究所提供。质粒 pCbDREB1A 们大部分是在冷诱导条件下被克隆出来的，但它们 (含荠菜DREB1A基因)由本实验室构建、保存 。 同样可 以激活 其它耐 逆基 因的表 达，所 以转 质粒pCAMBIA3300由澳大利亚国际农业分子生物 DREBIA基因不仅能够提高植物对低温的耐性，同 学应用中心(CAMBIA)提供。供试水稻品种为粳型 时还可以增强植物对干旱、高盐等非生物胁迫的耐 光温敏核不育系4008S，由安徽省农业科学院张培 受能力 。由于DREB转录因子在提高植物抗逆 江提供，本课题组繁殖、保存。 基因工程中的作用显著，近年来与之相关的研究报 1．2 培养基 道不断增多。 LB液体培养基(1L)：胰蛋 白胨 10g，酵母提取 荠菜 (Capsellabursa-pastoris)是一种常见的野 物5g，NaC110g，pH值7．0～7．2，高压灭菌 (固体 生植物，与拟南芥同属