茶多酚大孔树脂吸附分离性能研究.docVIP

茶多酚大孔树脂吸附分离性能的研究 1 材料与仪器 1.1 材料：茶叶( 有限公司) (经西北大学生命科学学院植物教研室鉴定); 1.2试剂及药品：茶多酚对照品(批号： ，中国药品生物制品检定所提供);大孔树脂LX-X由西安蓝晓科技开发有限公司提供。其它试剂均为分析纯。 1.3 仪器：岛津LC-20A型高效液相色谱系统：包括LC-20A型高压恒流泵、SPD-20A检测器和LC Solution工作站；UV -762紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司);电热恒温水浴锅(H·H·S21-6C，上海医疗器械五厂);电子分析天平(FC204，上海精科实业有限公司);旋转蒸发器R50 2B (上海亚蓉生化仪器厂);SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵；索式提取器；电热鼓风干燥箱;植物粉碎机(FZ102，天津市泰斯特仪器有限公司)；层析柱(40 mm×50 cm)。 2 方法 2.1茶多酚的定性、定量检测 2.1.1茶多酚的薄层定性检测 硅胶薄板制作 按1：3的比例称取硅胶G和0.5%的CMC-NA，研磨约30min后，平铺到10×20cm的洗净烘干的玻璃平板上，铺匀，隔夜，自然晾干。 展开剂配制 按氯仿：乙酸乙酯：正丁醇：甲酸 = 2：1.3：0.4：0.3的比例配置（约需80ml） 层析 活化薄板：105℃，30min。 点样：所用液体为留取的待测液，点样量为25uL。 饱和：在层析缸内扣放入一培养皿，再将薄板放在上面,板子不接触层析液，在其蒸汽中饱和30min以上。 层析：将板子放入展开剂中展开，待展开剂前沿距板子上端1.5cm取出，放入通风厨晾干。 结果观察及分析:（肉眼观察） 2.1.2茶多酚的定量测定—酒石酸亚铁分光光度法1 利用茶叶中的多酚类物质能与亚铁离子形成蓝色络合物的性质，将茶叶水提液及树脂法、有机溶剂法所得产品配制成一定浓度的溶液，使其与酒石酸亚铁溶液在一定的介质条件中反应生成蓝色络合物，通过测定络合物的吸光光度值，利用公式便可以算出茶叶及各产品中茶多分的含量。 仪器及用具 实验室常规仪器及感量0.0001的分析天平、分光光度计 2.1.2.1试剂和溶液 酒石酸亚铁溶液：准确称量0.500克硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和2.500g酒石酸钾钠（C4H4O6KNa·4H2O），用水溶解并定容至500ml。（溶液低温、避光保存，有效期一个月） PH=7.5的磷酸盐缓冲液 1/15M磷酸氢二钠：称取11.6885g磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O），用水溶解并定溶至500ml。 1/15M磷酸二氢钾：称取4.5390g磷酸二氢钾（KH2PO4·12H2O），用水溶解并定溶至500ml。 取上述1/5磷酸氢二钠溶液85ml和1/15M磷酸二氢钾溶液15ml，混匀即可。 2.1.2.2操作方法 试样制备： 称取3g茶叶，研碎后，将其放置于500ml的锥形瓶中，加沸蒸馏水450ml，立即移入沸水浴中，浸提45min，浸提完毕后立即趁热减压过滤，滤液移入500ml容量瓶中，残渣用少量热蒸馏水洗涤2～3次，并将滤液移入上述容量瓶中，冷却后用蒸馏水稀释至刻度。 称取多酚产品各0.025g，用甲醇溶解并定容至25ml，溶液浓度为0.1%。 测定步骤： a. 吸取上述试样液各1ml，分别加入已标号的25ml容量瓶中，然后各加入4ml水，5ml酒石酸亚铁溶液，充分混匀后用PH=7.5磷酸盐缓冲液定溶至计刻度线。 b. 不加试样液，配制试剂空白溶液，以作参考。 c. 用10ml比色杯，在波长540nm处测定各溶液的吸光度A。 测定结果如表1： 2.1.2.3结果计算 茶叶及茶多酚产品中的茶多酚含量，以干物质量百分率表示：计算公式为： A×1.957×2×L1 茶多酚（%）= ─────────── ×100 1000×L2×M×m 其中： L1——试剂的总量（ml） L2——测定时用液量（ml） M——试样的质量(g) m——试样干物质含量百分率（%） A——试样的吸光度 1.957——用10mm比色杯，当吸光度等于0.50时，每毫升茶汤中茶多酚相当于1.957mg。 0.239×1.957×2×25 茶多酚产品（%）= ─────────── ×100%=93.54% 1000×1×0.025 2.1.2.4结果讨论 2.1.3茶多酚的定量测定—酒石酸亚铁分光光度法2 1 原理 利用茶叶中的多酚类物质能与亚铁离子形成蓝色络合物的性质，将茶叶水提液及